Pagrindinis skirtumas tarp Klenow fragmento ir DNR polimerazės 1 yra tas, kad Klenow fragmentas yra didelė DNR polimerazės 1 dalis, kuriai trūksta 5′–3′ egzonukleazės aktyvumo, o DNR polimerazė yra E. coli fermentas, turintis visus tris. domenai, įskaitant 5′–3′ egzonukleazės aktyvumą.
DNR polimerazė yra vienas iš pagrindinių fermentų, dalyvaujančių DNR replikacijoje gyvuose organizmuose. Eukariotuose ir prokariotuose yra įvairių DNR polimerazės fermentų formų, atsižvelgiant į dydį ir formą. DNR polimerazės 1, 2 ir 3 randamos tik prokariotiniuose organizmuose ir atlieka skirtingus DNR replikacijos vaidmenis. DNR polimerazė 1 turi tris domenus su 5′–3′ polimerazės, 3′–5′ egzonukleazės aktyvumu ir 5′–3′ egzonukleazės aktyvumu. Klenow fragmentas yra proteolitinis DNR polimerazės 1 produktas. Jis pasižymi 5–3′ polimerazės ir 3′–5′ egzonukleazės aktyvumu, palyginti su nepažeistos DNR polimerazės 1 aktyvumu, tačiau jam trūksta 5′–3′ egzonukleazės aktyvumo.
Kas yra Klenow fragmentas?
Klenow fragmentas yra didelė DNR polimerazės 1 dalis. Skirtingai nuo DNR polimerazės 1, 5′–3′ egzonukleazės aktyvumo Klenow fragmente nematyti, nes jame nėra 5′–3′ priekinės egzonukleazės domeno. Klenow fragmentai gaunami virškinant DNR polimerazę 1 su proteaze, vadinama subtilizinu, kuris yra b altymus virškinantis fermentas. Kai kuriais atvejais Klenow fragmento 3′–5′ egzonukleazės aktyvumas tampa nepageidaujamas. Jį galima pašalinti įvedant mutaciją į geną, koduojantį Klenow fragmentą. Gautas fermentas, turintis tik 5′–3′ polimerazės aktyvumą, yra žinomas kaip egzo-Klenow fragmentas. Morfologiškai Klenow fragmentas primena žmogaus dešinę ranką. Jis turi N-galo 3′-5′ egzonukleazės domeną ir C-galo polimerazės domeną, atskirtą maždaug 30 A.
01 pav. Klenow fragmentas ir DNR polimerazė 1
Klenow fragmentas yra svarbus molekulinės biologijos metodų įrankis. Klenow fragmentai naudojami įvairiais būdais. Jie yra labai svarbūs klonuojant buku galu, kad susidarytų buki fragmentai. Klenow fragmentai gali pašalinti 3′ iškyšas arba užpildyti 5′ iškyšas, kad susidarytų buki galai. Be to, Klenow fragmentai naudojami dviejų grandžių DNR sintezei iš vienos grandinės. Be to, jie naudojami gaminant radioaktyviai pažymėtus zondus, naudojant nuo 5' iki 3' DNR priklausomą DNR polimerazės aktyvumą.
Kas yra DNR polimerazė 1?
DNR polimerazė 1 (Pol 1) yra prokariotuose randamas fermentas, reikalingas bakterijų DNR replikacijai. Tai pirmasis DNR polimerazės tipas, kurį 1956 m. atrado Arthuras Kornbergas. Pol 1 yra gausiausia E. coli polimerazė. Jį koduoja genas polA ir sudaro 928 aminorūgštys. Jį sudaro trys domenai. Visi trys domenai atlieka skirtingas funkcijas. Du domenai vykdo nuo 5′ iki 3′ egzonukleazės aktyvumą ir nuo 3′ iki 5′ egzonukleazės aktyvumą. Dėl šios Pol 1 veiklos jis yra populiarus kaip DNR atkuriantis fermentas, o ne DNR replikuojantis fermentas. Trečiasis domenas turi galimybę katalizuoti daugybę polimerizacijų (nuo 5′ iki 3′) prieš išleidžiant šabloninę DNR ir sujungiant Okazaki fragmentus, užpildant naują DNR ir pašalinant RNR pradmenis.
02 pav.: DNR polimerazė
Iš E Coli išskirtas Pol 1 buvo plačiai naudojamas molekulinėse srityse. Tačiau kai buvo atrasta Taq polimerazė, ji PGR technologijoje pakeitė E Coli Pol 1. Taq polimerazė yra termostabili DNR polimerazė, priklausanti Pol 1.
Kokie yra Klenow fragmento ir DNR polimerazės 1 panašumai?
- Klenow fragmentas yra didelė DNR polimerazės 1 dalis.
- Jie naudojami įvairiems tikslams.
Nr.
Kuo skiriasi Klenow fragmentas ir DNR polimerazė 1?
Pagrindinis skirtumas tarp Klenow fragmento ir DNR polimerazės 1 yra tas, kad Klenow fragmentas neturi 5′–3′ egzonukleazės aktyvumo, o DNR polimerazė 1 turi 5′–3′ egzonukleazės aktyvumą. Todėl Klenow fragmentas turi du domenus, o DNR polimerazė 1 turi visus tris domenus.
Toliau infografika rodo daugiau informacijos apie skirtumą tarp Klenow fragmento ir DNR polimerazės 1.
Santrauka – Klenow fragmentas prieš DNR polimerazę 1
DNR polimerazė 1 yra E. coli fermentas, turintis tris domenus: 5′–3′ polimerizacijos domeną, 3′–5′ egzonukleazės domeną ir 5′–3′ egzonukleazės domeną. Klenow fragmentas yra didelė DNR polimerazės dalis. Jam trūksta vieno DNR polimerazės 1 domeno, kuris yra 5′–3′ egzonukleazės domenas. Pagrindinis skirtumas tarp Klenow fragmento ir DNR polimerazės 1 yra tas, kad Klenow fragmentai neturi 5′–3′ egzonukleazės domeno, o DNR polimerazė 1 turi 5′–3′ egzonukleazės domeną.
