Pagrindinis skirtumas tarp radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų yra tas, kad radioaktyvieji zondai yra vienos grandinės DNR arba RNR sekos, paženklintos radioaktyviais izotopais, o neradioaktyvūs zondai yra vienos grandinės DNR arba RNR sekos, pažymėtos chemine žyma arba fluorescencinė žyma.
Nukleino rūgščių hibridizacija yra svarbus metodas molekulinėje biologijoje, ypač mikrobiologinėje diagnostikoje. Tai padeda nustatyti arba aptikti tam tikrą nukleorūgščių seką. Taikant šį metodą, nukleorūgštys yra pritvirtinamos prie kieto paviršiaus ir hibridizuojamos su zondu. Zondas yra DNR arba RNR fragmentas, papildantis dominančią seką. Jei mėginyje yra tikslinė seka, zondas su ja hibridizuojasi ir padarys jį aptinkamą. Yra dviejų tipų zondai: radioaktyvūs ir neradioaktyvūs zondai. Todėl galime pažymėti zondus radioaktyvia arba fluorescencine žyma.
Kas yra radioaktyvieji zondai?
Radioaktyvieji zondai yra vienos grandinės DNR arba RNR fragmentai su radioaktyvia žyma. Radioaktyviesiems zondams ruošti naudojami radioizotopai. Radioizotopai 32P, 33P ir 35S dažniausiai naudojami zondų ženklinimui. Be to, radioaktyvūs izotopai 3H ir 1251 taip pat mažesniu mastu naudojami zondams ženklinti. Tačiau jie naudojami tam tikroms reikmėms. Tarp skirtingų radioaktyviųjų izotopų 32P yra dažniausiai naudojamas izotopas radioaktyviesiems zondams žymėti.
Radioaktyvūs zondai užtikrina didesnį patikimumą ir specifiškumą. Todėl jie užtikrina maksimalų jautrumą ir leidžia tiksliai kiekybiškai įvertinti tikslines sekas. Tačiau yra keletas trūkumų, susijusių su radioaktyviais zondais. Jų pusinės eliminacijos laikas yra trumpas. Be to, jie yra pavojingi, o jų gamyba, naudojimas ir šalinimas kelia problemų. Be to, radioaktyvaus zondo paruošimas yra brangus procesas. Todėl dėl saugos problemų ir sąnaudų radioaktyvieji zondai šiais laikais nenaudojami kaip neradioaktyvūs zondai.
Kas yra neradioaktyvūs zondai?
Neradioaktyvūs zondai yra antrojo tipo zondai, pažymėti chemiškai. Digoksigeninas yra neradioaktyvus zondas, kuris yra antikūnų pagrindu sukurtas žymeklis. Digoksigenino zondai yra specifiniai ir jautrūs. Biotinas yra dar viena etiketė, naudojama neradioaktyvaus zondo paruošimui. Biotino / streptavidino ir digoksigenino / antikūnų aptikimo sistemos yra dažniausiai hibridizacijoje naudojami neradioaktyvūs zondai. Be to, krienų peroksidazės sistema yra dar viena neradioaktyvi zondo sistema. Kai šie neradioaktyvūs zondai yra hibridizuojami su tikslinėmis sekomis, juos galima aptikti naudojant autoradiografiją ar kitus vaizdo gavimo metodus.
01 pav. Hibridizacija su neradioaktyviais zondais
Neradioaktyvūs zondai nukleorūgščių hibridizacijoje naudojami dažniau nei radioaktyvūs zondai. Taip yra todėl, kad neradioaktyvūs zondai nėra susiję su pavojingomis medžiagomis. Be to, norint aptikti hibridizacijos signalą, neradioaktyviems aptikimo metodams reikalingas trumpesnis ekspozicijos laikas. Tačiau DNR hibridizacijos su neradioaktyviais zondais veiksmai paprastai yra varginantys ir atimanti daug laiko. Be to, parduodami sprendimai yra brangūs.
Kokie yra radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų panašumai?
- Radioaktyvūs ir neradioaktyvūs zondai yra dviejų tipų zondai, naudojami hibridizuojant nukleino rūgštis.
- Jie palengvina tikslinių sekų pavyzdyje aptikimą.
- Abu zondo tipai yra vienodai jautrūs ir specifiniai.
Kuo skiriasi radioaktyvūs ir neradioaktyvūs zondai?
Radioaktyvūs zondai yra vienos grandinės DNR arba RNR sekos, pažymėtos radioaktyviais izotopais, o neradioaktyvūs zondai yra vienos grandinės DNR arba RNR sekos, pažymėtos chemine žyma. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų. Be to, radioaktyvieji izotopai yra pavojingi. Taigi radioaktyvieji zondai yra labai pavojingi, o neradioaktyvūs zondai nėra pavojingi.
Be to, kitas skirtumas tarp radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų yra jų trūkumai. Trumpas pusėjimo laikas ir pavojai, susiję su jų gamyba, naudojimu ir šalinimu, yra radioaktyviųjų zondų naudojimo trūkumai. Kita vertus, DNR hibridizacijos su neradioaktyviais zondais veiksmai paprastai yra varginantys ir atimanti daug laiko.
Toliau infografika rodo daugiau palyginimų, susijusių su radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų skirtumais.
Santrauka – radioaktyvūs ir neradioaktyvūs zondai
Zondas yra DNR arba RNR fragmentas, kuriame yra nukleotidų seka, kuri papildo dominančią seką. Norint aptikti tikslinę seką, zondai gali būti pažymėti radioaktyviu, fluorescenciniu arba cheminiu būdu. Zondai mėginyje jungiasi su papildomomis sekomis. Radioaktyvieji zondai yra paženklinti radioaktyviais izotopais, o neradioaktyvūs zondai – biotinu, digoksigeninu arba krienų peroksidaze. Taigi tai yra pagrindinis skirtumas tarp radioaktyvių ir neradioaktyvių zondų.
