Pagrindinis skirtumas tarp GFP ir EGFP yra tas, kad GFP yra laukinio tipo b altymas, įtrauktas į nežinduolių ląstelių molekulinį klonavimą, o EGFP yra patobulintas arba modifikuotas GFP tipas, kurį galima naudoti žinduolių ląstelėse..
Molekulinis klonavimas yra pažangi technika, kurią mokslininkai labai naudoja ekspresuodami b altymus rekombinantine technologija. Taikant rekombinantinės DNR technologiją, rekombinantinį vektorių būtina sėkmingai transformuoti į šeimininką. Taigi transformacijos proceso metu reikia nustatyti ir patvirtinti, ar dominantis genas buvo transformuotas į šeimininką, ar ne. Norėdami tai įvertinti, molekuliniai biologai taiko keletą metodų. Iš šių metodų vienas yra reporterio genas. Šie reporterių genai veikia kaip atrenkami žymenys, norint pasirinkti tinkamus transformantus. Taigi, žalias fluorescencinis b altymas (GFP) ir sustiprintas žalias fluorescencinis b altymas (EGFP) yra du reporteriniai b altymai, naudojami molekuliniam klonavimui.
Kas yra GFP?
GFP yra laukinio tipo b altymas, kuriame yra 238 aminorūgščių liekanos ir keletas atrenkamų aminorūgščių sekų regionų, išskiriančių jį iš kitų fluorescencinių b altymų. Be to, šis laukinio tipo b altymas iš pradžių buvo izoliuotas nuo Aequorea Victoria; medūzų rūšis. Tačiau esant gamtos reiškiniams, medūzos, reaguodamos į tam tikrus dirgiklius, sugebėjo sukurti žalios spalvos fluorescenciją.
Anksčiau ši koncepcija nustebino mokslininkus, ir jie nusprendė ją panaudoti savo rekombinantinės DNR technologijose. Todėl mokslininkai šią mutantinę laukinio tipo geno formą naudojo kaip reporterio geną savo genų ekspresijos tyrimuose. Laukinio tipo GFP genas gali gaminti b altymą, kuris kambario temperatūroje arba UV šviesoje suteikia fluorescenciją. Todėl, įterptas į transformantus, jis išreiškia ir gamina fluorescenciją. Jei fluorescencija atsiranda po transformacijos proceso, tai patvirtina transformacijos proceso sėkmę. Paprastais žodžiais tariant, fluorescencinė emisija rodo sėkmingą dominantį geną pernešančio vektoriaus transformaciją į šeimininką.
01 pav.: GFP
Dėl šios priežasties GFP veikia kaip in vivo genų ekspresijos žymuo. Šiuo metu GFP gamybai naudojami genų inžinerijos metodai. Taip pat yra daug patobulintų GFP versijų, pvz., EGFP. Taigi tai leidžia efektyviai panaudoti GFP molekulinio klonavimo ir genų ekspresijos tyrimuose.
Kas yra EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein arba EGFP yra patobulinta GFP versija. Paprastais žodžiais tariant, galime apibrėžti EGFP kaip sukonstruotą laukinio tipo GFP versiją. Kai GFP laukinio tipo genas mutuoja, jis daro teigiamą poveikį. Taigi, mutavęs GFP genas leidžia išreikšti naujus simbolius ir dėl to galime sukurti patobulintą GFP su patobulintomis savybėmis. Be to, mes galime sėkmingai įvesti mutacijas į laukinio tipo GFP geną, naudodami švitinimo ar cheminius metodus. Tada šie mutuoti genai gamina EGFP, kuris turi daugiau naudingų savybių.
02 pav.: EGFP
Patobulintos EGFP charakteristikos yra tokios;
- Gali skleisti stipresnius fluorescencinius signalus.
- Jis labai jautrus.
- Galima naudoti žinduolių ląstelėms, o ne prokariotams ir kitiems žemesnio lygio eukariotams.
- Taip pat užtikrina didesnį produkto grynumą.
Todėl, palyginti su GFP, EGFP yra tinkamiausias pasirinkimas genų ekspresijos tyrimams. Tačiau produktas yra brangesnis, palyginti su GFP.
Kokie yra GFP ir EGFP panašumai?
- GFP ir EGFP yra du b altymai, kurie gali skleisti žalią spalvą
- Todėl genų ekspresijos tyrimuose abu veikia kaip reporteriniai b altymai.
- Be to, naudojant rekombinantinės DNR technologiją galima susintetinti abu.
- Be to, lengva toliau keisti šiuos du tipus, kad būtų susintetintos patobulintos formos.
Kuo skiriasi GFP ir EGFP?
Reporterio genas yra genas, kuris prisijungia prie dominančio geno rekombinantinėje DNR technologijoje. Tai signalizuoja apie sėkmingą rekombinantinio vektoriaus transformaciją į šeimininką. Čia GFP ir EGFP yra dviejų tipų žali fluorescenciniai b altymai, kurie veikia kaip reporteriniai b altymai. Tačiau pagrindinis skirtumas tarp GFP ir EGFP yra tas, kad GFP yra laukinio tipo, o EGFP yra sukurta GFP versija. Be to, EGFP turi daugiau naudingų savybių nei GFP. Pavyzdžiui, EGFP skleidžia stipresnę fluorescencinę šviesą ir yra jautresnė nei GFP. Kitas skirtumas tarp GFP ir EGFP yra sistemos, kuriose galime jas naudoti. Ne žinduolių sistemos naudoja GFP, o žinduolių sistemos naudoja EGFP.
Toliau pateiktoje infografikoje lentelės forma pateikiamas skirtumas tarp GFP ir EGFP.
Santrauka – GFP prieš EGFP
GFP ir EGFP yra reporteriniai b altymai molekulinio klonavimo ir genų ekspresijos tyrimuose. GFP yra laukinio tipo b altymas, kuris yra žaliai fluorescencinis b altymas. Iš pradžių b altymas buvo izoliuotas nuo medūzos Aequorea victoria. Priešingai, EFGP yra sustiprinta GFP b altymo forma. Tai patobulintomis savybėmis pasižymintis laukinio tipo mutantas. Taigi EFGP signalas yra stipresnis ir jautresnis. Todėl mes galime jį naudoti žinduolių vektoriams. Priešingai, GFP daugiausia naudojamas tik ne žinduolių vektoriams. Apskritai tai yra skirtumas tarp GFP ir EGFP.
