Pagrindinis skirtumas – popierius, plonas sluoksnis ir stulpelių chromatografija
Popieriaus chromatografija, plonasluoksnė chromatografija ir chromatografija kolonėlėje yra trijų tipų chromatografijos metodai. Pagrindinis skirtumas tarp popieriaus chromatografijos, plonasluoksnės chromatografijos ir kolonėlės chromatografijos yra pagrįstas stacionarios fazės tipu, naudojamu chromatografijos technikoje. Popieriaus chromatografijoje naudojamas celiuliozinis popierius kaip stacionari fazė, plonasluoksnė chromatografija – aliuminio oksidas arba silikagelis kaip stacionari fazė, o kolonėlės chromatografijoje kaip stacionari fazė naudojama kolonėlė, užpildyta tinkama matricine medžiaga.
Biomolekulių, tokių kaip b altymai ir angliavandeniai, atskyrimo ir identifikavimo procese chromatografija yra svarbus biofizinis metodas. Chromatografija atskiria junginius pagal jų tirpumą, dydį ir krūvį. Remiantis atskyrimo mechanizmu, chromatografijoje naudojami tokie mechanizmai kaip jonų mainai, absorbcija, pasiskirstymas ir dydžio išskyrimas, ir yra trys chromatografijos metodai; būtent popieriaus, plono sluoksnio ir kolonėlės chromatografija. Popieriaus chromatografija yra pagrįsta kieto skysčio adsorbcija ir junginio tirpumu, o celiuliozinis popierius naudojamas kaip stacionari fazė. Plonasluoksnė chromatografija pagrįsta molekulių adsorbcija kietajame skystyje. Jame yra stacionari fazė, kuri paprastai yra pagaminta iš aliuminio oksido arba silikagelio, ir judrioji fazė, kuri yra tirpiklis. Kolonėlės chromatografijoje naudojama kolonėlė, užpildyta matrica, kuri naudojama molekulėms atskirti daugiausia pagal jų dydį, afinitetą arba krūvį.
Kas yra popieriaus chromatografija?
Popieriaus chromatografija yra paprasčiausias naudojamas chromatografijos tipas ir jis nenaudojamas dideliems tyrimams. Jis daugiausia naudojamas studentų laboratorijose, siekiant nustatyti biomolekules, tokias kaip aminorūgštys ir angliavandeniai, esantys mišiniuose. Popieriaus chromatografijoje naudojama stacionari fazė, pagaminta naudojant celiuliozinį popierių arba vatmano filtravimo popierių, ir mobilioji fazė, kuri paprastai ruošiama naudojant organinius tirpiklius, tokius kaip n-butanolis ir kt. Stacionarioji fazė prisotinama vandeniu, todėl stacionari fazė tampa skysta. Taigi, kai junginiai yra dėmėti ir leidžiami veikti dalyvaujant judriai fazei, priklausomai nuo junginių tirpumo, jie yra atskiriami. Taigi, sukūrus chromatogramą, galima atlikti dažymą, siekiant nustatyti kiekvieno junginio eigos ilgį. Tokiu būdu galima apskaičiuoti sulaikymo koeficientą.
01 pav.: popieriaus chromatografija
Popieriaus chromatografija gali būti toliau klasifikuojama į didėjančią popieriaus chromatografiją ir mažėjančią popieriaus chromatografiją, atsižvelgiant į tekančio tirpiklio kryptį.
Kas yra plonasluoksnė chromatografija?
Plonasluoksnė chromatografija arba TLC yra dažniausiai naudojamas būdas identifikuoti skirtingas mišinyje esančias aminorūgštis arba identifikuoti b altymus. Atskyrimo technika pagrįsta kietojo skysčio adsorbcija. Atliekant plonasluoksnę chromatografiją, kaip stacionari fazė naudojama plokštelė, pagaminta iš aliuminio oksido arba silikagelio. Tirpiklio mišinys skiriasi priklausomai nuo poreikio ir tirpikliui paruošti gali būti naudojami įvairūs organinių junginių, tokių kaip n-butanolis, acto rūgštis ir vanduo, deriniai. Atskirti junginiai yra dėmėti ant plokštelės ir panardinami į tirpiklių mišinį. Kai tirpiklis juda aukštyn pagal plokštelės suteiktą kapiliarinį poveikį, plokštelėje esantys junginiai taip pat juda priklausomai nuo jų tirpumo tirpiklyje.
02 pav.: plonasluoksnė chromatografija
Dėmių aptikimas po chromatogramos atliekamos skirtingomis dažymo procedūromis. Kai kurie naudoja ninhidrino dažymą, kuris yra gana toksiškas dažymo būdas. Šiuolaikinėse plonasluoksnėse chromatogramose naudojami fluorescenciniai metodai, kad būtų galima peržiūrėti chromatogramą po paleidimo. Atsižvelgiant į jo nuvažiuotus atstumus, galima apskaičiuoti kiekvieno junginio sulaikymo trukmę. Tai gali būti naudojama atskirto junginio tipui nustatyti pagal naudojamą mišinį. TLC daugiausia naudojama amino rūgštims identifikuoti b altymų mišinyje ir atskirti įvairių tipų monosacharidus, esančius mišinyje.
Kas yra stulpelių chromatografija?
Stulpelinė chromatografija yra platus terminas, naudojamas apibūdinti daugelio tipų chromatografijos metodus, kuriuose naudojamas kolonėlės atskyrimo metodas. Kolonėlės chromatografijoje junginiams atskirti naudojama fizinė kolonėlė su užpildymo medžiaga. Atskyrimas gali būti pagrįstas skirtingomis fizinėmis junginių savybėmis. Šios savybės gali būti krūvis, dydis, 3D konformacija ir surišimo talpa ir tt Taigi, kolonėlė, supakuota su matricine medžiaga, veikia kaip stacionari fazė, o kolonėlėje naudojamas plovimo buferis veikia kaip mobilioji fazė.
Jei molekulės atskiriamos pagal dydį, pakavimo medžiaga supakuojama taip, kad palieka poras, kuriomis junginiai galėtų judėti. Taigi, didesnės molekulės, kurios negali tekėti per poras, išplautos pirmiausia, o mažesnės molekulės išsiplauna daug ilgiau.
03 pav. Stulpelių chromatografija
Jei molekulės atskiriamos pagal jų krūvį, nejudančioje fazėje bus arba anijonų, arba katijonų mainai, prie kurių junginiai bus pritraukti pagal jų krūvį. Taigi plovimo etape nesusirišę junginiai bus eliuuojami. Pridėjus eliuavimo buferio, surišti įkrauti junginiai bus eliuuojami. Šių eliuentų aptikimas dažniausiai grindžiamas spektrofotometriniais metodais.
Kokie yra popieriaus plono sluoksnio ir kolonėlės chromatografijos panašumai?
- Viso popieriaus plono sluoksnio ir kolonėlės chromatografija naudojami trys biomolekulių, tokių kaip aminorūgštys, b altymai ir angliavandeniai, atskyrimo būdai.
- Popieriaus plono sluoksnio ir kolonėlės chromatografijos metodai turi judančią fazę ir stacionarią fazę.
- Popieriaus plonasluoksnės chromatografijos ir kolonėlės chromatografijos metoduose naudojami biofiziniai atskyrimo mechanizmai.
Kuo skiriasi popieriaus plono sluoksnio ir kolonėlės chromatografija?
Popierius prieš ploną sluoksnį ir stulpelių chromatografiją |
|
| Popieriaus chromatografija | Popieriaus chromatografija yra chromatografijos metodas, naudojamas junginiams atskirti pagal skysčio ir skysčio adsorbciją ir junginio tirpumą. Jis naudoja celiuliozinį popierių kaip stacionarią fazę. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Plonasluoksnė chromatografija yra dar vienas chromatografijos metodas, pagrįstas molekulių adsorbcija kietajame skystyje. Jame yra stacionari fazė, pagaminta iš aliuminio oksido arba silikagelio, o judrioji fazė yra tirpiklis, kuris yra tirpiklis. |
| Stulpelinė chromatografija | Stulpelio chromatografijoje naudojama kolonėlė, užpildyta matrica, kuri naudojama molekulėms atskirti daugiausia pagal jų dydį, afinitetą arba krūvį. |
| Stacionarioji fazė | |
| Popieriaus chromatografija | Iš vatmano nitroceliuliozės pagamintas popierius naudojamas kaip stacionari fazė popieriaus chromatografijoje. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Aliuminio oksidas arba silikagelis naudojamas kaip stacionari plonasluoksnės chromatografijos fazė. |
| Stulpelinė chromatografija | Kolonėlė, užpildyta tinkama užpildymo medžiaga, naudojama kaip stacionari fazė kolonėlės chromatografijoje. |
| Mobilusis etapas | |
| Popieriaus chromatografija | Bengiantis tirpiklis yra mobilioji popieriaus chromatografijos fazė. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Bengiantis tirpiklis yra plonasluoksnės chromatografijos judri fazė. |
| Stulpelinė chromatografija | Plovimo buferis yra mobilioji kolonėlės chromatografijos fazė. |
| Atskyrimui naudojami mechanizmai | |
| Popieriaus chromatografija | Popieriaus chromatografija pagrįsta kietojo skysčio absorbcija. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Plonasluoksnė chromatografija pagrįsta kietojo skysčio absorbcija. |
| Stulpelinė chromatografija | Stulpelių chromatografija pagrįsta dydžio išskyrimu, krūviu ir forma. |
| Elucijos buferis | |
| Popieriaus chromatografija | Nereikalaujama naudojant popieriaus chromatografiją. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Plonasluoksnei chromatografijai nereikia. |
| Stulpelinė chromatografija | Reikalingas kolonėlės chromatografijoje. |
| Aptikimas | |
| Popieriaus chromatografija | Dažymas ir nustatant sulaikymo koeficientą. |
| Plonasluoksnė chromatografija | Dažymas ir nustatant sulaikymo koeficientą. |
| Stulpelinė chromatografija | Spektrofotometrinis nustatymas. |
Santrauka – popierinis plonas sluoksnis vs stulpelio chromatografija
Popieriaus chromatografija, TLC ir kolonėlės chromatografija yra atskyrimo metodai, naudojami atskirti biomolekules, pvz., b altymus, aminorūgštis ir angliavandenius (daugiausia monosacharidus). Popieriaus chromatografijoje naudojamas celiuliozinis popierius kaip stacionari fazė, o atskyrimo mechanizmas pagrįstas kietojo skysčio adsorbcija. TLC taip pat naudoja kietojo skysčio adsorbcijos mechanizmus. Molekulės atskiriamos nejudančioje fazėje, priklausomai nuo jų tirpumo judrioje fazėje. Kolonėlės chromatografijoje naudojamos fizinės savybės, tokios kaip dydis, forma, krūvis ir junginio molekulinė masė. Kolonėlė, užpildyta matricine medžiaga, veikia kaip stacionari fazė, o plovimo buferis veikia kaip tirpiklio fazė. Tai yra skirtumas tarp plono sluoksnio popieriaus ir kolonėlės chromatografijos.
