Pagrindinis skirtumas – CFU ir MPN
Kolonijų formavimo vienetas (CFU) ir labiausiai tikėtinas skaičius (MPN) yra du metodai, naudojami mikroorganizmams mėginiuose suskaičiuoti. Abu parametrai naudojami vandens kokybei ir išmatų indikatorinėms bakterijoms vandens mėginiuose nustatyti. Kolonijas formuojantis vienetas yra matas, naudojamas gyvybingų bakterijų ar grybelių ląstelių skaičiui konkrečiame tam tikro mėginio tūryje arba svoryje suskaičiuoti. Standartinis šio parametro vienetas yra CFU/ml arba CFU/g. Labiausiai tikėtinas skaičius yra kitas vienetas, naudojamas gyvybingų bakterijų ląstelių skaičiui skystame mėginyje matuoti. Pagrindinis skirtumas tarp CFU ir MPN yra tas, kad CFU apskaičiuojamas iš bakterijų ir grybelių kolonijų, augančių ant kietos agaro plokštelės, o MPN apskaičiuojamas iš gyvybingų bakterijų, augančių skystoje terpėje.
Kas yra CFU?
Kolonijų formavimo vienetas (CFU) yra parametras, matuojantis gyvybingų bakterijų arba grybelių ląstelių skaičių tam tikrame mėginyje. Metodas, kuris skaičiuoja kolonijas formuojančius vienetus, vadinamas standartiniu plokštelių skaičiumi. Gyvybingos kolonijos, atsirandančios agaro plokštelėse, išreiškiamos CFU 1 ml (kolonijas formuojantis vienetas mililitre) mėginio skysčiams arba CFU 1 g (kolonijas formuojantis vienetas viename grame) mėginio kietoms medžiagoms.
Yra du įprasti metodai, naudojami KSV matavimui mėginyje. Jie yra plėvelės metodas ir liejimo plokštės metodas. Šiuos du metodus palaiko metodas, vadinamas serijiniu skiedimu. Serijiniu būdu atskiesti mėginiai leidžia gauti suskaičiuojamą kolonijų skaičių agaro paviršiuje. Žinomą mėginio tūrį galima paskleisti ant agaro lėkštelės paviršiaus arba sumaišyti su agaru ir supilti ant lėkštelės. Tada plokštelė inkubuojama ir susidariusios kolonijos suskaičiuojamos. Kolonijų skaičius yra susijęs su mikroorganizmų skaičiumi pradiniame mėginyje. Plokštelės, kuriose yra per daug kolonijų arba per mažai kolonijų, neįtraukiamos į skaičiavimą, nes tų plokštelių rezultatai gali būti statistiškai netikslūs. Statistiškai geriausias diapazonas yra 30–300 kolonijų agaro lėkštelėje. Taigi, norint tiksliai suskaičiuoti, reikia pasirinkti tinkamas plokšteles. Serijinis skiedimas atliekamas pirmiau nurodytai funkcijai.
Suskaičiavus gyvybingų kolonijų skaičių lėkštelėse, KSV/ml galima apskaičiuoti naudojant šią lygtį.
CFU vienam mililitre pradinio mėginio=kolonijų skaičius plokštelėje X praskiedimo koeficientas
Skiedimo koeficientas=(1/ plokštelės praskiedimas)
Pavyzdžiui, jei 10-4 praskiedimo plokštelėje yra 149 kolonijos, bakterijų skaičius 1 ml pradinio mėginio gali būti apskaičiuojamas taip.:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 arba 1490000
=1. 49 x 106
01 pav.: Kolonijų formavimo vienetas
Kas yra MPN?
Labiausiai tikėtinas skaičius yra alternatyvus KSV/ml matas. MPN taip pat įvertina gyvybingas ląsteles skystame mėginyje. Jis skaičiuoja organizmus, augančius skystoje kultūroje, ir yra daugiausia bakteriologinis metodas. Šis metodas ypač naudingas mėginiams, kuriuose yra maža bakterijų ląstelių koncentracija; pavyzdžiui, pienas, geriamasis vanduo ir tt MPN vertė išreiškiama 100 ml tūrio. MPN remiasi statistiniu metodu, pagrįstu tikimybių teorija. Yra statistinių lentelių, skirtų MPN reikšmėms 100 ml mėginio rasti. Šiose lentelėse rodomi rezultatai esant 95 % patikimumo riboms.
MPN vertė apskaičiuojama atlikus metodą, vadinamą kelių vamzdelių fermentacijos metodu. Trys mėgintuvėlių rinkiniai, kuriuose yra tinkama auginimo terpė, pasėjami trimis skirtingais mėginio tūriais, pvz., 10 ml, 1 ml ir 0.1 ml ir inkubuojamas augimui. Pasibaigus inkubaciniam laikotarpiui, mėgintuvėliai įvertinami + (teigiamas) arba – (neigiamas) dėl augimo buvimo ar nebuvimo. Tada teigiamų ir neigiamų rezultatų modelis lyginamas su MPN statistinių tikimybių lentele, siekiant įvertinti mikroorganizmų skaičių. Tada MPN reikšmė pateikiama 100 ml mėginio. MPN plačiai naudojamas koliforminėms bakterijoms, esančioms vandens mėginiuose, aptikti.
02 pav.: MPN lentelė
Kuo skiriasi CFU ir MPN?
CFU prieš MPN |
|
| CFU yra matas, naudojamas išreikšti gyvybingų bakterijų arba grybelių kolonijų skaičių tam tikrame mėginyje. | MPN yra alternatyvi CFU priemonė ir matuoja gyvybingų bakterijų ląstelių skaičių skystame mėginyje. |
| Įrenginys | |
| CFU/ml arba KSV/g | MPN/100 ml |
| Apskaičiavimas | |
| CFU apskaičiuojamas skaičiuojant kolonijų, užaugintų agaro lėkštelėse, skaičių. | MPN apskaičiuojamas lyginant teigiamus ir neigiamus mėgintuvėlių modelius su MPN statistine lentele. |
| Serialo skiedimo technika | |
| Serialas skiedžiamas prieš dedant mėginius į agaro lėkštes. | Skaičiuojant MPN serijinis skiedimas paprastai neatliekamas |
| Metodai | |
| Spred plate metodas ir liejimo plokštelės metodas yra dviejų tipų metodai, naudojami norint gauti CFU. | Kelių vamzdžių fermentacija yra metodas, naudojamas MPN vertei gauti. |
Santrauka – CFU prieš MPN
Matuoti mikrobų augimą reikia dėl daugelio priežasčių. Maisto perdirbimo įmonėse būtina išmatuoti mikroorganizmų kiekį ir tipą maiste. Maisto pramonėje ir medicinoje būtina užtikrinti, kad sterilizavimo procedūros būtų taikomos efektyviai. Nuotekų valymo įrenginiuose būtina reguliariai atlikti mikrobų skaičių. Optimizuojant molekulinės biologijos procedūrą, būtina išmatuoti kolonijų skaičių lėkštelėse. Taigi, yra įvairių skaičiavimo ir augimo matavimo metodų. CFU ir MPN yra du tokie metodai, plačiai taikomi įvairiose srityse. CFU yra gyvybingų bakterijų ir grybelių kolonijų, esančių tam tikrame mėginyje, skaičiaus matas. Jis apskaičiuojamas naudojant standartinį plokštelių skaičiavimo metodą arba gyvybingų plokštelių skaičiavimo metodą. MPN yra dar vienas matas, išreiškiantis tam tikrame skysčio mėginio tūryje esančių bakterijų ląstelių skaičių. Jis apskaičiuojamas naudojant kelių vamzdžių fermentacijos metodą ir MPN lentelę. Tai yra skirtumas tarp CFU ir MPN.
Atsisiųskite CFU vs MPN PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatų pastabose. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp CFU ir MPN.
