Pagrindinis skirtumas tarp Elisa ir Elispot yra tas, kad Elisa yra su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, kuris nustato bendrą išskiriamų signalinių b altymų koncentraciją, o Elispot yra su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, aptinkantis atskiras citokinus išskiriančias ląsteles.
Elisa ir Elispot yra du su fermentais susiję imunosorbento tyrimai, plačiai naudojami medicinoje, augalų patologijoje, biotechnologijose ir įvairiose farmacijos pramonės šakose. Taikant šiuos metodus, b altymo analitė aptinkama prieš ją nukreiptu antikūnu. Elisa yra populiariausias su fermentais susietas imunosorbentas, naudojamas laboratorijose. Kita vertus, Elispot yra su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas, kuris nenaudojamas vietoj Elisa, o naudojamas kartu su Elisa laboratorijose.
Kas yra Elisa Assay?
Elisa yra su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, kuris nustato bendrą išskiriamų signalinių b altymų koncentraciją. Tai plačiai naudojamas analitinis biocheminis tyrimas, kurį 1971 m. pirmą kartą aprašė Engvall ir Perlmann. Šiame technikoje naudojamas kietosios fazės fermento imunologinis tyrimas, siekiant nustatyti specifinio b altymo buvimą skystame mėginyje, naudojant antikūnus, nukreiptus prieš šį specifinį b altymą. Šis tyrimas yra plačiai naudojamas diagnostikos įrankis medicinoje, augalų patologijoje ir biotechnologijose.
ELISA testo mechanizmas
Didžiojoje ELISA testo dalyje pradžioje ant kieto pagrindo (mikrolitrų plokštelės) imobilizuojamas nežinomas antigeno kiekis. Tada ant kieto atraminio paviršiaus uždedamas atitinkamas pirminis antikūnas. Šis antikūnas sudaro kompleksą su antigenu (antigeno-antikūno kompleksas). Su antigenu susietą pirminį antikūną galima aptikti antriniu antikūnu, kuris yra susietas su fermentu per biokonjugaciją. Paskutiniame Elisa testo etape pridedama medžiaga, kurioje yra fermento substrato. Jei pirminis antikūnas tinkamai prisijungia prie antigeno, substratas sukelia aptinkamą spalvos pasikeitimą. Galiausiai tai įvertina antigeno kiekį mėginyje.
01 pav.: Įvairūs Elisa tipai
Be to, yra įvairių požiūrių į Elisa, pvz., tiesioginė Elisa ir netiesioginė Elisa. Šiuo metu įvairūs Elisa testai naudojami aptikti žmogaus patogenus, tokius kaip Mycobacterium tuberculosis, rotavirusas, hepatito B virusas, hepatito C virusas, enterotoksinus gaminantis E.coli, ŽIV ir SARS-CoV-2.
Kas yra Elispot Assay?
Elispot yra su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas, aptinkantis atskiras citokinus išskiriančias ląsteles. Cecil Czerkinsky pirmą kartą aprašė ELISpot 1983 m. Tai yra tyrimo tipas, kurio tikslas – kiekybiškai išmatuoti vienos ląstelės citokinų sekrecijos dažnį. Jis taip pat priskiriamas prie metodų, kurie naudoja antikūnus biologinei arba cheminei b altymų analitei aptikti. Fluorospoto tyrimas yra Elispot tyrimo variantas, kuriame naudojama fluorescencija, siekiant išanalizuoti kelias analites (labiau slaptus b altymus).
Elispoto testo mechanizmas
Šiuo mechanizmu iš pradžių į mikrolitrinių plokštelių šulinėlius pridedami specifiniai citokinams monokloniniai antikūnai. Tada norimos stebimos ląstelės pridedamos į šulinėlius. Vėliau ląstelės inkubuojamos. Ląstelių inkubacijos metu ląstelėms leidžiama reaguoti į bet kokius dirgiklius ir išskirti citokiną. Citokinai, kuriuos išskyrė inkubuojamos ląstelės, prisijungs prie antikūnų, nes ląstelės yra apsuptos citokinams specifinių monokloninių antikūnų.
02 pav.: Elispoto tyrimas
Norint aptikti šiuos citokinams specifinius monokloninius antikūnus, į duobutę pridedami biotinilinti specifiniai aptikimo antikūnai. Biotinilinti specifiniai aptikimo antikūnai fiksuoja citokinams specifinius monokloninius antikūnus duobutėse. Be to, į duobutes pridedami streptavidino ir fermento konjugatai, kad jie susijungtų su aptikimo antikūnais. Paskutiniame etape į šulinius pridedami specifiniai substratai. Dėl fermentų konjugatų ir substratų reakcijos šuliniuose susidaro atskiros dėmės. Šios skirtingos dėmės nuskaitomos automatizuotame ELISpot skaitytuve. Galiausiai tai dar labiau apskaičiuos citokinų sekrecijos dažnį.
Kokie yra Elisa ir Elispot panašumai?
- Jie abu yra su fermentais susiję imunosorbento tyrimai.
- Abu tyrimai aptinka specifines b altymų analites.
- Šiuose tyrimuose naudojami specifiniai antikūnai b altymų analitų identifikavimui.
- Abejuose tyrimuose naudojami fermentai ir substratai.
- Jie naudojami kaip diagnostikos priemonė medicinos laboratorijose.
Kuo skiriasi Elisa ir Elispot?
Elisa yra su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, kuris nustato bendrą išskiriamų signalinių b altymų koncentraciją. Kita vertus, Elispot yra su fermentais susietas imunosorbentinis tyrimas, kuriuo matuojamos atskiros citokinus išskiriančios ląstelės. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp Elisa ir Elispot. Be to, atliekant Elisa testą, antigenas pirmiausia imobilizuojamas ant mikrolitrų šulinių. Priešingai, Elispot teste antikūnas pirmiausia imobilizuojamas ant mikrolitrų šulinėlių. Taigi tai dar vienas skirtumas tarp Elisa ir Elispot.
Toliau pateiktoje infografikoje pateikiama išsami Elisa ir Elispot skirtumo analizė lentelės pavidalu.
Santrauka – Elisa vs Elispot
Elisa ir Elispot yra du su fermentais susiję imunosorbento tyrimai, plačiai naudojami medicinoje, augalų patologijoje, biotechnologijose ir įvairiose farmacijos pramonės šakose. Elisa aptinka ligando (b altymo) buvimą skystame mėginyje naudodama antikūnus, nukreiptus prieš matuojamą ligandą. Elispot tyrimas yra plačiai naudojamas imuninio atsako stebėjimo metodas. Jis aptinka atskiras citokinus išskiriančias ląsteles naudodamas antikūnus. Tai ir imunologinis, ir biologinis tyrimas. Taigi, tai yra Elisa ir Elispot skirtumo santrauka.
