Pagrindinis skirtumas tarp izokratinio ir gradiento eliuavimo yra tas, kad izokratinis eliuavimas reiškia pastovios koncentracijos palaikymą judrioje fazėje, o gradientinis eliuavimas reiškia įvairios koncentracijos palaikymą judrioje fazėje.
Chromatografijoje vartojami terminai izokratinis ir gradientinis eliuavimas. Chromatografijos metu naudojame stacionarią fazę, kuri yra nejudanti medžiaga, kartu su judančia faze, judančia medžiaga. Izokratinis ir gradientinis eliuavimas apibūdina judriosios fazės savybes.
Kas yra isokratinis eliuavimas?
Izokratinis eliuavimas yra terminas, naudojamas chromatografijoje, kai judriosios fazės koncentracija yra pastovi. Čia judriosios fazės koncentracija yra pastovi viso chromatografinio proceso metu. Šiame procese mes galime stebėti smailės plotį, didėjantį sulaikymo laikui tiesiškai chromatogramoje. Tačiau tai sukelia trūkumą – vėlyvojo eliuavimo smailės tampa labai plokščios ir plačios. Todėl šias plačias viršūnes sunku atpažinti kaip viršūnes.
Be to, atliekant izokratinį eliuavimą, selektyvumas nesikeičia pagal kolonėlės matmenis. Tai reiškia, kad selektyvumas nepriklauso nuo stulpelių matmenų pokyčių. Čia ilgis ir skersmuo laikomi kolonėlės matmenimis. Todėl smailės eliuuoja ta pačia tvarka.
Kas yra gradiento eliuavimas?
Gradientinis eliuavimas yra terminas, naudojamas chromatografijoje, kai čia judriosios fazės koncentracija skiriasi. Kitaip tariant, judriosios fazės koncentracija neturi išlikti pastovi. Pavyzdžiui, naudojant HPLC, įprastas atskyrimo metodas iš pradžių naudoja 10% metanolio, o baigiasi 90%, palaipsniui didinant koncentraciją. Judanti fazė susideda iš dviejų komponentų: silpno tirpiklio ir stipraus tirpiklio. Silpnas tirpiklis leidžia ištirpintai medžiagai eliuuoti lėtai, o stiprus tirpiklis sukelia greitą tirpios medžiagos eliuavimą. Atvirkštinės fazės chromatografijoje kaip silpną tirpiklį naudojame vandenį, o kaip stiprų tirpiklį – organinį.
01 pav.: HPLC
Be to, gradiento eliuavimo metodas sumažina vėliau eliuuojančius komponentus, kad jie greičiau išsiskirtų, todėl chromatogramoje susidaro siaura smailė. Šis metodas pagerina smailės formą ir smailės aukštį. Be to, taikant gradiento eliuavimo metodą, eliuavimo tvarka keičiasi keičiantis kolonėlės matmenims.
Kuo skiriasi isokratinis ir gradientinis eliuavimas?
Chromatografijoje vartojami terminai izokratinis ir gradientinis eliuavimas. Izokratinis ir gradientinis eliuavimas apibūdina judriosios fazės savybes. Pagrindinis skirtumas tarp izokratinio ir gradiento eliuavimo yra tas, kad izokratinis eliuavimas reiškia pastovios koncentracijos palaikymą judrioje fazėje, o gradientinis eliuavimas reiškia kintamos koncentracijos palaikymą judrioje fazėje.
Taikant izokratinio eliuavimo metodą, smailės plotis didėja ties sulaikymo laiku. Tačiau taikant gradiento eliuavimo metodą, vėliau eliuuojančių komponentų sulaikymas sumažėja, todėl eliuavimas tampa greitesnis ir susidaro siauros smailės. Be to, izokratiniame eliuavime selektyvumas nepriklauso nuo kolonėlės matmenų, o gradiento eliuavimo atveju selektyvumas kinta keičiantis kolonėlės matmenims.
Toliau pateiktoje lentelėje apibendrinamas skirtumas tarp izokratinio ir gradiento eliuavimo.
Santrauka – Izokratinis vs gradientinis eliuavimas
Izokratinis eliuavimas ir gradientinis eliuavimas apibūdina judriosios fazės savybes. Pagrindinis skirtumas tarp izokratinio ir gradiento eliuavimo yra tas, kad izokratinis eliuavimas reiškia pastovios koncentracijos palaikymą judrioje fazėje, o gradientinis eliuavimas reiškia kintamos koncentracijos palaikymą judrioje fazėje.
