Pagrindinis skirtumas tarp sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo yra tas, kad ultracentrifuguojant sacharozės gradientu naudojamas nenutrūkstamas sacharozės gradientas, o ultracentrifuguojant sacharozės pagalvėje naudojamas nepertraukiamas sacharozės gradientas.
Sacharozės gradientas ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas yra du panašūs metodai, naudojami atskirti tam tikrų tipų makromolekules. Abiem būdais naudojamas sacharozės tankio gradientas. Tačiau ultracentrifuguojant sacharozės gradientu, naudojamas nepertraukiamas tankio gradientas, o sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo atveju naudojamas nepertraukiamas tankio gradientas.
Kas yra sacharozės gradiento ultracentrifugavimas?
Sacharozės gradiento ultracentrifugavimas yra metodas, kurį galima naudoti makromolekulėms, tokioms kaip DNR, RNR ir b altymai, frakcionuoti. Šioje technikoje yra keli žingsniai. Tai yra sacharozės gradiento paruošimas, centrifugavimas, atskyrimas ir eliuavimas. Gradiento paruošimas yra pagrindinis šios technikos žingsnis. Taikant šį metodą, mėginys, kuriame yra skirtingo dydžio makromolekulės, yra sluoksniuojantis ant sacharozės gradiento kolonėlės paviršiaus. Centrifuguojant skirtingo dydžio makromolekulės nusėda per sacharozės gradiento kolonėlę skirtingu greičiu. Sedimentacija priklauso nuo kelių veiksnių, įskaitant centrifugavimo jėgą, dydžio formą ir makromolekulių tankį, gradiento tankį ir klampumą. Centrifugavimo pabaigoje makromolekulės erdviškai atskiriamos pagal tankį. Didesnės makromolekulės (didelio tankio makromolekulės) nusėda dugno link. Šviesesnės (mažo tankio makromolekulės) lieka gradiento viršuje. Todėl molekulės išsiskiria kaip skirtingos juostos. Tada juostos turi būti atskirtos ir konkrečios makromolekulės išvalymas nuo sacharozės.
01 pav. Sacharozės gradiento ultracentrifugavimas
Taikant, šis metodas plačiai naudojamas DNR molekulėms frakcionuoti. Sacharozės gradiento ultracentrifugavimas dažniausiai naudojamas b altymų komplekso dydžiui ir sudėčiai apibūdinti. Be to, šis metodas naudojamas daliniam mRNR gryninimui.
Kas yra sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas?
Ultracentrifugavimas su sacharozės pagalvėlėmis yra dar vienas metodas, leidžiantis frakcionuoti makromolekules. Skirtingai nuo sacharozės tankio gradiento ultracentrifugavimo, sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas naudoja nepertraukiamą tankio gradientą. Sacharozės koncentracija atskirais žingsniais didėja iš viršaus į apačią. Taikant šį metodą, atskyrimas pasiekiamas išskaidytą ekstraktą dedant ant nedidelio tūrio sacharozės tirpalo centrifugos mėgintuvėlyje, vadinamojoje sacharozės pagalvėje. Tai leidžia geriau atskirti centrifuguojant dideliu greičiu. Kai molekulės atsiskiria kaip juosta tarp sacharozės pagalvėlės, b altą juostą galima surinkti ir išvalyti. Be to, priemaišas galima toliau pašalinti naudojant sacharozės pagalvėlės metodą. Sacharozės pagalvėlės metodas leidžia 60-70% mėgintuvėlio užpildyti mėginiu. Taigi sacharozės pagalvėlės metodas leidžia apdoroti didesnį mėginio tūrį.
Kokie yra sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo panašumai?
- Sacharozės gradientas ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas yra du metodai, naudojami makromolekulių mišiniui atskirti.
- Abu metodais naudojamas sacharozės gradientas.
- Centrifugavimas yra abiejų metodų žingsnis.
- Kiekvienu metodu molekulės nusėda kaip juosta arba zona.
Kuo skiriasi sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas?
Sacharozės gradiento ultracentrifugavimas yra metodas, kai centrifugos mėgintuvėlyje naudojamas nepertraukiamas sacharozės gradientas, o sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas yra metodas, kai naudojamas nenutrūkstamas sacharozės gradientas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo.
Be to, ultracentrifugavimas su sacharozės pagalvėlėmis leidžia apdoroti didesnį mėginio tūrį, o sacharozės gradiento ultracentrifugavimas leidžia apdoroti palyginti mažą mėginio tūrį.
Toliau infografika pateikia daugiau skirtumų tarp sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo.
Santrauka – sacharozės gradientas ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimas
Ultracentrifuguojant sacharozės gradientu, makromolekulės atskiriamos naudojant nuolatinį sacharozės gradientą. Priešingai, ultracentrifuguojant sacharozės pagalvėlę, naudojamas nepertraukiamas sacharozės gradientas, kad būtų galima atskirti tam tikro tipo daleles mišinyje. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp sacharozės gradiento ir sacharozės pagalvėlės ultracentrifugavimo. Sacharozės pagalvėlės metodas leidžia surinkti morfologiškai nepažeistas daleles, nes nesukelia mechaninio įtempimo, kitaip nei sacharozės gradiento ultracentrifugavimas, kuris susmulkina molekules į mėgintuvėlio dugną. Be to, ultracentrifugavimas pagal sacharozės pagalvę leidžia apdoroti didesnį mėginio tūrį nei ultracentrifugavimas sacharozės gradientu.
