Pagrindinis skirtumas – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleazės yra nukleazės, kurios specifiškai skaido RNR į mažesnius vienetus. Juos galima suskirstyti į dvi kategorijas; endoribonukleazės ir eksoribonukleazės. Endoribonukleazė yra endonukleazė, kuri gali skaidyti viengrandę arba dvigrandę RNR. Jis suskaido fosfodiesterio ryšius RNR polinukleotidų grandinėje. Pavyzdžiai yra RNazė A, RNazė III, RNazė T1, RNazė P ir RNazė H. Eksoribonukleazė yra egzonukleazė, kuri degradavo RNR pašalindama galinius nukleotidus iš RNR molekulės 5’ galo arba 3’ galo. Pavyzdžiai yra RNazė R, RNazė II, RNazė D ir RNazė PH.pagrindinis skirtumas tarp RNASE A ir RNASE H yra tas, kad RNazė A yra kasos ribonukleazė, kuri specifiškai skaido vienos grandinės RNR į smulkesnius komponentus, o RNazė H yra nespecifinis fermentas, kuris suskaido RNR-DNR hibrido RNR į mažesnius vienetus. hidrolizinis mechanizmas.
Kas yra RNASE A?
RNazė A yra kasos ribonukleazė, kuri specifiškai suskaido nesuporuotas citozino ir uracilo liekanas 3' vienos grandinės RNR gale. RNazė H veikia esant didesnei druskos koncentracijai (0,3 M arba didesnei NaCl koncentracijai). Hidrolitinė reakcija yra dviejų etapų. Jis sudaro 3' fosforilintą produktą per 2', 3' ciklinį monofosfato tarpinį produktą. Nors jis būdingas viengrandei RNR esant didesnei druskos koncentracijai, ji taip pat gali suardyti dvigrandė RNR ir RNR RNR ir DNR hibride esant mažesnei NaCl koncentracijai (mažesnei nei 0,3 M NaCl).
Bruce'as Merrifieldas pirmą kartą susintetino šį fermentą. RNazė A yra labai populiarus fermentas molekuliniuose tyrimuose. Galvijų kasos RNazė A yra RNazės A pavyzdys. Tai vienas iš atspariausių fermentų, naudojamų laboratorijoje. Šiam fermentui jo veiklai nereikia kofaktoriaus. Tai labai termostabilus fermentas. RNazė A yra pirmasis fermentas ir trečiasis b altymas, kuriam buvo nustatyta teisinga aminorūgščių seka. Šis fermentas yra labai mažas, jame yra 124 aminorūgštys ir 12600 da molekulinė masė. Jame yra keturios histidino liekanos (His 12 ir His 119, kurios dalyvauja katalizinėje reakcijoje).
01 pav.: RNazė A
RNazę A galima išskirti virinant neapdorotą mėginį. Kai verda, visi kiti fermentai skaido likusią RNazę A. RNazė A yra nuostabiai stabilus fermentas. Šis fermentas slopina ribonukleazės inhibitorių b altymą, sunkiųjų metalų ir uridino vanadato kompleksus.
Kas yra RNase H?
RNazė H yra nespecifinis ribonukleazės fermentas, kuris gali skaidyti RNR RNR ir DNR hibride per hidrolizinę reakciją. RNazė H suardo RNR 3'-O-P ryšį RNR-DNR hibride. Galų gale jis gamina 3'OH ir 5' fosfatus baigtus produktus. DNR replikacijoje jis atlieka pagrindinį vaidmenį pašalindamas RNR pradmenį, kai susidaro naujos DNR grandinės. Laboratorinėmis sąlygomis jis specifiškai skaido RNR RNR-DNR hibridinėje, bet ne DNR ir nehibridizuotoje RNR. Ir šis fermentas paprastai naudojamas RNR šablonui sunaikinti po to, kai cDNR sintezės metu susidaro pirmoji papildoma DNR grandinė.
02 pav.: RNazė H
RNazė H taip pat naudojama atliekant apsaugos nuo nukleazės tyrimus. Jis taip pat gali būti įtrauktas į poli A uodegos pašalinimą iš mRNR. RNazė H turi galimybę sunaikinti nekoduojančią RNR ląstelės viduje ir išorėje. Metalo jonai reikalingi kaip šio b altymo aktyvumo kofaktoriai. Chelatorius (EDTA) gali būti naudojamas fermentui RNazės H slopinti.
Kokie yra RNASE A ir RNASE H panašumai?
- Abu yra b altyminiai.
- Abu yra endoribonukleazės
- Abu gali suardyti RNR.
- Abu atlieka hidrolizines reakcijas.
- Molekulinės laboratorijos naudoja abu šiuos dalykus.
Kuo skiriasi RNASE A ir RNASE H?
RNASE A prieš RNASE H |
|
| RNazė A yra kasos ribonukleazė, kuri, esant didesnei druskos koncentracijai, specifiškai skaido 3’ galą nesuporuotų vienos grandinės RNR citozino ir uracilo liekanų. | RNazė H yra nespecifinis ribonukleazės fermentas, kuris gali skaidyti RNR RNR ir DNR hibride per hidrolizinę reakciją. |
| RNR skilimo pobūdis | |
| RNazė A specialiai skaido vienos grandinės RNR esant didesnei druskos koncentracijai. | RNazė H skaldo RNR RNR ir DNR hibride. |
| Bendrųjų veiksnių veiklai reikia | |
| RNazės A veiklai nereikia kofaktorių. | RNazei H reikalingi metalų jonai, kaip jos veiklos kofaktoriai. |
| B altymų aktyvumo inhibitoriai | |
| Ribonukleazės inhibitorių b altymas, sunkiųjų metalų ir uridino vanadato kompleksai slopina RNRazės A aktyvumą. | Chelatorius (EDTA) slopina RNazės H aktyvumą. |
| RNR pradmenų pašalinimas DNR replikacijos metu | |
| RNazė A nenaudojama RNR pradmeniui pašalinti DNR replikacijos metu. | RNazė H naudojama RNR pradmeniui pašalinti DNR replikacijos metu |
| DNR šablono pašalinimas papildomos DNR (C-DNR) sintezėje | |
| RNazė A nenaudojama RNR šablono pašalinimui komplementariosios DNR (C-DNR) sintezės metu. | RNazė H naudojama RNR šablono pašalinimui komplementariosios DNR (C-DNR) sintezės metu. |
| Poly-A-uodegos pašalinimas mRNR, hibridizuotoje į Oligo (dt) | |
| RNazė A nenaudojama „poli-A uodegai“pašalinti iš mRNR, hibridizuotos su oligo (dt). | RNazė H naudojama „poli-A uodegai“pašalinti iš mRNR, hibridizuotos su oligo (dt) |
Santrauka – RNASE A prieš RNASE H
Ribonukleazės yra nukleazės fermentai, kurie gali suskaidyti RNR į mažesnius vienetus. Jie yra dviejų tipų; endoribonukleazės ir eksoribonukleazės. Endoribonukleazė yra endonukleazė, kuri gali skaidyti viengrandę arba dvigrandę RNR. Ir jis suskaido fosfodiesterio ryšį RNR polinukleotidų grandinėje. RNazė A ir RNazė H yra dvi endoribonukleazės. RNazė A yra kasos ribonukleazė, kuri specifiškai skaldo nesuporuotas citozino ir uracilo liekanas viengrandinės RNR 3’ gale esant didesnei druskos koncentracijai. RNazė H yra nespecifinis ribonukleazės fermentas, kuris gali skaidyti RNR RNR-DNR hibride per hidrolizinę reakciją. Tai yra skirtumas tarp RNazės A ir RNazės H.
Atsisiųskite PDF RNASE A vs RNASE H
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp RNASE A ir RNASE H
