Pagrindinis skirtumas tarp Coomassie ir sidabro dažymo yra tas, kad coomassie dažymas yra b altyminio dažymo metodas, kai naudojamas Coomassie briliantinis mėlynas dažymas, o dažymas drožlėmis yra b altymų dažymo metodas, naudojant sidabro dėmę.
B altymų atskyrimas ir identifikavimas yra svarbūs proteomų analizės žingsniai. Po gelio elektroforezės jiems reikia didelės skiriamosios gebos b altymų apibūdinimo. Yra daug dažymo metodų, kurie apima įvairias dėmes, tokias kaip anijoniniai dažai (Briliantinis mėlynasis Coomassie), metalo katijonai (imidazolas-cinkas), sidabro dėmės ir fluorescenciniai dažai ir tt Kartais gali būti naudojami ir radioaktyvūs zondai. Dažymo technikos pasirinkimas priklauso nuo paprastumo, vaizdinės įrangos prieinamumo laboratorijoje ir kt.
Kas yra Coomassie dažymas?
Coomassie dažymas yra dažymo b altymais metodas, naudojant Coomassie briliantiškai mėlyną dėmę. Paprastai tai vadinama Coomassie mėlyna technika. Coomassie briliantinė mėlyna yra populiariausias anijoninis b altymų dažiklis. Šis dažymas paprastai nudažo beveik visus b altymus, turinčius gerą kiekybinį tiesiškumą, esant vidutiniam jautrumui. Coomassie briliantinio mėlynumo dėmė nespecifiškai jungiasi su beveik visais b altymais. Yra du skirtingi coomassie briliantinio mėlynumo dėmių variantai: R-250 ir G-250. R-250 suteikia trumpesnį dažymo laiką, o G-250 yra jautresnių ir aplinkai nekenksmingų formulių.
01 pav.: Coomassie dažymas
Coomassie dažai yra labai populiarūs atliekant masių spektrometrijos tyrimus ir b altymų identifikavimo tyrimus. Be to, biologiškai saugus coomassie beicas yra nepavojinga coomassie blue G-250 formulė, kuri šiuo metu yra rinkoje. Šios formulės pranašumas yra tas, kad skalavimui ir dėmių pašalinimui reikia tik vandens. Biologiškai saugus coomassie beicas pasižymi jautrumu, lygiaverčiu įprastiniam coomassie beicui G-250, bet geresniam nei coomassie beicas R-250. Be to, jis turi paprastesnį ir greitesnį dažymo protokolą nei įprastas Coomassie blue G-250. Coomassie mėlynos spalvos dažymo trūkumas yra tas, kad jis yra mažiau jautrus, palyginti su dažymu sidabru. Dažymas Coomassie mėlyna spalva yra maždaug 50 kartų mažiau jautrus nei dažymas sidabru. Tačiau dėl savo įrišimo paprastumo jis yra pageidaujamas daugelyje tyrimų.
Kas yra sidabro dažymas?
Dažymas sidabru – tai b altyminio dažymo metodas, kai naudojamas sidabro dažymas. Beicavimas sidabru naudojamas ir agarozės, ir poliakrilamido gelių dažymui. Sidabrinį b altymų dažymą agarozės gelyje pirmą kartą 1973 m. sukūrė Kerenyi ir Gallyas. Vėliau jis buvo pritaikytas b altymams poliakrilamido gelyje, kurie naudojami SDS-PAGE. Šiuo metu dažymas sidabru taip pat naudojamas DNR arba RNR dažymui. Norint nudažyti gelius, šiuo metodu geliai inkubuojami su sidabro nitrato tirpalu. Sidabrinis dažymas nudažo vietas, kuriose yra b altymų, nuo rudos iki juodos spalvos.
02 pav.: Sidabro dažymas
Sidabro dažymo intensyvumas priklauso nuo pirminės b altymo struktūros. Be to, naudojamų indų švara ir reagentų grynumas taip pat gali turėti įtakos sidabro dažymo kokybei. Tačiau sidabro dažymo trūkumas yra tas, kad jis negali aptikti visų b altymų, ypač glikoproteinų ir b altymų su didelėmis modifikuotomis grupėmis, prijungtomis prie šoninių grandinių.
Kokie yra Coomassie ir sidabro dažymo panašumai?
- Dažymas Coomassie ir sidabru yra du b altymų dažymo būdai.
- Jie gali nudažyti ir b altymus, ir DNR.
- Abu dažymo būdai turi trūkumų.
- Šių metodų veiksmai yra panašūs, pvz., tvirtinimas, dažymas ir dažymas.
Kuo skiriasi Coomassie ir sidabro dažymas?
Coomassie dažymas yra b altymų dažymo metodas, kai naudojamas Coomassie briliantinis mėlynas dažymas, o dažymas drožlėmis yra b altymų dažymo metodas, kai naudojamas sidabro dažymas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp Coomassie ir sidabro dažymo. Be to, Coomassie dažymas yra mažiau jautrus nei dažymas sidabru.
Toliau pateiktoje infografikoje lentelės pavidalu pateikiami Coomassie ir sidabro dažymo skirtumai, kad būtų galima palyginti.
Santrauka – Coomassie vs sidabro dažymas
Norint vizualizuoti b altymus, galima atlikti b altymams būdingą dažų surišimo arba spalvą išgaunanti cheminę reakciją. Tai vadinama b altymų dažymu. Coomassie ir sidabro dažymas yra du metodai, naudojami b altymų dažymui. Coomassie dažymo technikoje naudojamas Coomassie briliantinis mėlynas beicas, o dažant drožlėmis naudojamas sidabro beicas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp Coomassie ir sidabro dažymo.
