Pagrindinis skirtumas tarp BL21 ir DH5 Alpha yra tas, kad BL21 yra proteazės trūkumas, genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė, pirmiausia naudojama b altymų ekspresijai, o DH5 Alpha yra genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė su recA1 mutacija, pirmiausia naudojama plazmidės transformacijai.
E. coli yra vienas iš žinomiausių organizmų rekombinantinių b altymų gamybai. Per daugelį metų tai tapo populiariausia išraiškos platforma. Jis taip pat naudojamas kaip ląstelių gamykla. BL21 ir DH5 Alpha yra dvi genetiškai modifikuotos E. coli ląstelės, šiuo metu naudojamos atitinkamai b altymų ekspresijai ir plazmidės transformacijai.
Kas yra BL21?
BL21 yra proteazės trūkumo genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė, pirmiausia naudojama b altymų ekspresijai. E. coli BL21 yra bakterinė ląstelė, kilusi iš B padermės. Jis turi Lon proteazės ir ompT išorinės membranos proteazės defektų. Jis dažniausiai naudojamas rekombinantinių b altymų ekspresijai, nes jis paprastai suteikia ekspresuotų b altymų stabilumo. BL21 yra naudingas b altymų ekspresijai su pCold I-IV DNR ir pCold TF DNR. Tačiau ši kompetentinga E. coli ląstelė nėra skirta b altymų ekspresijos sistemai, naudojanti T7 promotorių, pvz., pET sistemą. Priežastis yra ta, kad BL21 neišreiškia T7 RNR polimerazės. Be to, nerekomenduojama naudoti plazmidės konstravimui ar paruošimui, nes ji neturi recA mutacijos.
01 pav.: BL21
BL21 pirmą kartą aprašė Studier 1986 m. po įvairių B linijos modifikacijų. BL21 ląstelėse trūksta LON proteazės, kuri skaido daugelį svetimų b altymų. Be to, trūksta kito geno, koduojančio išorinės membranos proteazę (OmpT), kurios funkcija yra skaidyti ekstraląstelinius b altymus. Šių b altymų trūkumas skatina sėkmingą svetimo b altymo gamybą E. coli BL21 ląstelėse. Be to, hsdSB mutacija šiose ląstelėse apsaugo nuo svetimos DNR metilinimo ir BL21 ląstelių pažeidimo.
Kas yra DH5 Alpha?
DH5 Alpha yra genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė su recA1 mutacija, kuri pirmiausia naudojama plazmidės transformacijai. DH5 Alpha E. coli ląsteles genetiškai modifikavo amerikiečių biologas Douglasas Hanahanas, siekdamas maksimaliai padidinti transformacijos efektyvumą. DH5 alfa ląstelė turi tris skirtingas mutacijas: recA1, endA1 ir lacZΔM15. recA1 yra vieno taško mutacija, pakeičianti gliciną 160 recA polipeptide ir asparto rūgšties liekana. Ši mutacija išjungia rekombinazių aktyvumą ir inaktyvuoja homologinę rekombinaciją. endA1 mutacija inaktyvuoja tarpląstelinę endonukleazę, kuri neleidžia jai suardyti įterptos plazmidės.
02 paveikslas: DH5 alfa
Be to, lacZΔM15 mutacija leidžia atlikti mėlynai b altą transformuotų ląstelių atranką. Šios ląstelės yra kompetentingos ląstelės. Jie dažnai naudojami su kalcio chlorido transformacija norimai plazmidei įterpti. Naujausiais tyrimais nustatyta, kad DH5 alfa ląstelė su Hanahan metodu buvo veiksmingiausia kompetentinga ląstelė transformuoti plazmidę.
Kokie yra BL21 ir DH5 Alpha panašumai?
- BL21 ir DH5 Alpha yra du genetiškai modifikuoti E.coli
- Abu yra kompetentingos ląstelės.
- Jos susideda iš skirtingų mutacijų.
- Abu neturi natūralios buveinės.
- Jie naudojami laboratoriniais tikslais, pvz., ekspresijos tyrimams ir klonavimo procedūroms.
Kuo skiriasi BL21 ir DH5 Alpha?
BL21 yra proteazės trūkumo genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė, pirmiausia naudojama b altymų ekspresijai. Kita vertus, DH5 Alpha yra genetiškai modifikuota kompetentinga E. coli ląstelė su recA1 mutacija, pirmiausia naudojama plazmidės transformacijai. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp BL21 ir DH5 Alpha. Be to, BL21 E. coli ląstelėje nėra recA1 mutacijos, o DH5 Alpha E. coli ląstelėje yra recA1 mutacijos.
Toliau pateiktoje infografikoje lentelės pavidalu pateikiami skirtumai tarp BL21 ir DH5 Alpha.
Santrauka – BL21 vs DH5 Alpha
Nepatogenines E. coli padermes genetiškai sukūrė mokslininkai laboratoriniams ekspresijos tyrimams ir klonavimo tikslais. BL21 ir DH5 Alpha yra dvi genetiškai modifikuotos E. coli ląstelės. BL21 pirmiausia naudojamas b altymų ekspresijos tyrimams. Kita vertus, DH5 Alpha pirmiausia naudojamas plazmidės transformacijos tikslais. Taigi, tai yra skirtumo tarp BL21 ir DH5 Alpha santrauka.
