Pagrindinis skirtumas tarp konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA yra tas, kad konkurencinis ELISA tyrimas naudoja slopinamąjį antigeną, o nekonkurencinga ELISA tyrimui nenaudoja slopinimo antigeno.
Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas (ELISA) yra imunologinis tyrimas, kuriuo aptinkami įvairūs taikiniai, pvz., antikūnai, antigenai, b altymai ir glikoproteinai. Tai greitas ir paprastas būdas atlikti. Todėl jis dažniau naudojamas tyrimų ir diagnostikos tikslais. ELISA apima fermentų naudojimą ir specifinį antikūnų bei antigenų surišimą. Atsižvelgiant į tai, kaip vyksta reakcijos, yra keturių tipų ELISA: tiesioginis ELISA, netiesioginis ELISA, sumuštinis ELISA ir slopinimo ELISA. Tiesioginis, netiesioginis ir sumuštinis ELISA yra nekonkurencinės ELISA rūšys, o slopinamasis ELISA yra išsamaus ELISA tipas. Pagrindinis šio straipsnio tikslas – aptarti skirtumą tarp konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA.
Kas yra konkurencinė ELISA?
Konkurencinė ELISA nustato antigeno koncentraciją mėginyje aptikdama signalo trukdžius. Čia tyrime naudojamas inhibitorinis antigenas. Taigi tai yra slopinimo ELISA tipas. Šios procedūros metu mėginyje esantys antigenai konkuruoja su pasirinktu etaloniniu antigenu dėl prisijungimo prie konkretaus pažymėto antikūno kiekio. Be to, ši procedūra pradedama inkubuojant mėginį su pertekliniu pažymėto antikūno kiekiu. Be to, etaloninis antigenas turi būti iš anksto padengtas kelių šulinėlių tyrimo plokštelėje. Tada mėginio mišinys turi būti dedamas į tyrimo plokštelę, kurioje yra etaloninis antigenas. Laisvieji antikūnai prisijungs prie etaloninio antigeno, priklausomai nuo antigeno kiekio mėginyje. Taigi, jei mėginio antigeno yra daugiau, bus aptikta mažiau etaloninio antigeno. Taigi sukuriamas silpnesnis signalas.
01 pav.: ELISA
Priešingai, kai mėginyje yra mažiau antigeno, vis daugiau etaloninio antigeno užims antikūnus ir duos stiprų signalą. Kadangi konkurencinis ELISA signalas duoda stipresnį signalą, kai mėginyje yra mažas antigenų kiekis, konkurencinis ELISA tyrimas yra labai jautrus, net ir mėginiams, kuriuose yra nedidelis antigenų skaičius.
Kai kuriuose konkurencinguose ELISA rinkiniuose vietoj paženklinto antikūno naudojamas pažymėtas antigenas. Čia pažymėtas antigenas ir mėginio antigenas konkuruos dėl prisijungimo prie pirminio antikūno. Panašiai, kai antigeno kiekis mėginyje yra mažas, žymėto antigeno, kuris jungiasi su antikūnais, kiekis bus didesnis ir sukuria stipresnį signalą.
Kas yra nekonkurencinė ELISA?
Iš keturių ELISA tipų trys tipai yra nekonkurencinė ELISA. Tai tiesioginis ELISA, netiesioginis ELISA ir sumuštinis ELISA. Visi trys formatai veikia pagal bendrą ELISA principą, tačiau jų metodikos šiek tiek skiriasi.
Tiesioginis ELISA tyrimas naudoja fermentu pažymėtą pirminį antikūną. Taigi antrinių antikūnų jam nereikia. Todėl tiesioginė ELISA yra greitesnė nei kitų tipų ELISA. Pirminis antikūnas tiesiogiai prisijungs prie imobilizuoto tikslinio antigeno, esančio plokštelėje. Taigi įvyks fermento ir substrato reakcija, sukeldama matomą signalą.
02 pav. Sumuštinis ELISA
Skirtingai nei tiesioginis ELISA, netiesioginis ELISA naudojamas nepažymėtas pirminis antikūnas ir fermentu pažymėtas antrinis antikūnas. Kai pirminis antikūnas prisijungia prie imobilizuoto antigeno, antrinis antikūnas prisijungia prie pirminio antikūno. Antriniame antikūne esantis fermentas reaguos su antigenu ir duos matomą signalą. Sumuštinis ELISA skiriasi nuo tiesioginės ir netiesioginės ELISA. Čia antikūnas imobilizuojamas prie tyrimo plokštelės sienelės.
Kokie yra konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA panašumai?
- Konkurencinė ir nekonkurencinė ELISA yra dviejų tipų imunosorbento tyrimo metodai.
- Tai labai lankstūs ir jautrūs metodai.
- Be to, konkurencinis ir nekonkurencinis ELISA yra su fermentais susiję imunologiniai tyrimai.
- Be to, abu metodai generuoja signalą dėl fermento ir substrato reakcijos.
Kuo skiriasi konkurencinė ir nekonkurencinė ELISA?
Konkurencinė ELISA yra ELISA tipas, kuris priklauso nuo analitinės antigeno ir žymėtojo antigeno užbaigimo, kad būtų nustatytas ribotas specifinio antikūno kiekis. Kita vertus, tokios konkurencijos tarp dominančio antigeno ir etaloninio antigeno nekonkurenciniame ELISA nėra. Taigi tai yra pagrindinis skirtumas tarp konkurencingos ir nekonkurencinės ELISA. Panašiai konkurencinė ELISA yra slopinimo ELISA, o nekonkurencinė ELISA nėra slopinimo ELISA. Taigi, tai taip pat yra skirtumas tarp konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA.
Be to, konkurencinė ELISA yra tinkamesnė norint išmatuoti mažą dominančio antigeno kiekį. Tai jautrus metodas. Kita vertus, nekonkurencinga ELISA nepriklauso nuo mėginyje esančių antigenų skaičiaus. Todėl tai taip pat yra skirtumas tarp konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA.
Toliau infografika paaiškina palyginus skirtumą tarp konkurencinės ir nekonkurencinės ELISA.
Santrauka – konkurencinis ir nekonkurencinis ELISA
Konkurencinis ir nekonkurencinis ELISA yra du pagrindiniai ELISA arba su fermentais susietų imunosorbentų tyrimai. Apibendrinant skirtumą tarp konkurencinio ir nekonkurencinio ELISA, konkurencinis ELISA remiasi konkurencija tarp dominančio antigeno ir etaloninio antigeno dėl riboto antikūnų kiekio. Todėl konkurencinė ELISA taip pat vadinama slopinimo ELISA. Kita vertus, nekonkurencinga ELISA nesiremia konkurencija tarp tikslinių antigenų ir etaloninių antigenų. Jis naudoja žymėto specifinio antikūno perteklių dominančios analitės atžvilgiu. Taigi tai yra pagrindinis skirtumas tarp konkurencingos ir nekonkurencinės ELISA. Tiesioginis ELISA, netiesioginis ELISA ir sumuštinis ELISA yra trys pagrindiniai nekonkurencinės ELISA tipai.
