Pagrindinis skirtumas – tiesioginis ir netiesioginis ELISA
Su fermentais susietas imuninis tyrimas (ELISA), taip pat žinomas kaip fermentinis imuninis tyrimas, yra serologinis tyrimas, kuriuo aptinkami antikūnai kraujyje. Jis naudojamas kaip diagnostikos priemonė, siekiant išsiaiškinti, ar pacientas buvo paveiktas tam tikro tipo viruso ar kito infekcinio agento (antigeno) ir ar organizmas gamino antikūnus prieš infekciją. ELISA taip pat gali nustatyti buvusias ir esamas infekcijas. Todėl gydytojai ELISA dažnai naudoja kaip išankstinį patikrinimą prieš nuodugnią ligų analizę. Šį tyrimą galima atlikti laboratorijoje, paimant iš paciento kraujo mėginį. Yra dviejų tipų ELISA testai: tiesioginis ELISA ir netiesioginis ELISA. Pagrindinis skirtumas tarp tiesioginio ir netiesioginio ELISA yra tas, kad netiesioginis ELISA yra jautresnis ir reikia pridėti antrinį antikūną, o tiesioginis ELISA yra mažiau jautrus ir naudojamas tik pirminis antikūnas.
Kas yra tiesioginė ELISA?
ELISA yra ligų diagnostikos testas, atliekamas siekiant nustatyti tam tikrų antigenų ar antikūnų buvimą kraujyje. Tai atliekama kaip plokštelės tyrimas. Jis naudoja antikūnus, susietus su lengvai ištiriamais fermentais. Antigenų buvimas serumo mėginyje jungiasi su specifiniais antikūnais, susietais su fermentais. Paskutiniame etape pridedamas specifinis substratas, kuris reaguotų su fermentu. Fermentas paverčia substratą spalvotu arba signalą gaminančiu produktu. Cheminio substrato spalvos pasikeitimas atskleidžia tam tikro antikūno buvimą serumo mėginyje. Tiesioginis ELISA testas naudoja tik pirminį antikūną, susietą su fermentu. Prisijungęs prie antigeno, jis greitai pakeičia spalvą, o tai rodo infekcinio agento buvimą kraujyje. Tačiau tiesioginio ELISA metu signalų intensyvumas yra silpnesnis, nes epitopai apsiriboja antigenų surišimu. Taigi tiesioginė ELISA yra mažiau jautri, palyginti su netiesiogine ELISA.
01 pav.: Tiesioginis ELISA testas
Kas yra netiesioginis ELISA?
ELISA gali būti atlikta naudojant dviejų tipų antikūnus, būtent; pirminis antikūnas ir antrinis antikūnas. Netiesioginis ELISA įrankis naudoja abiejų tipų antikūnus, kad sustiprintų signalus, kad būtų geriau aptikta. Netiesioginis ELISA metodas atliekamas taip.
- Lėkštelės inkubuojamos su antigenais ir plaunamos, kad užblokuotų nespecifinį surišimą.
- Tada pridedami pirminiai antikūnai ir nuplaunami.
- Su fermentais susietas antrinis antikūnas pridedamas ir nuplaunamas.
- Pridedamas substratas ir leidžiama reaguoti su fermentais.
- Signalai aptinkami ir konkretaus antigeno buvimas ar nebuvimas mėginyje.
Atliekant netiesioginį ELISA testą, keli antriniai antikūnai gali prisijungti prie vieno pirminio antikūno. Antriniai antikūnai yra susieti su lengvai ištiriamais fermentais. Todėl vienas susiejimas gali duoti stiprų signalą dėl daugiau nei vienos sąveikos. Taigi netiesioginė ELISA yra jautresnė nei tiesioginė ELISA. Tačiau netiesioginė ELISA gali duoti nespecifinius signalus dėl kryžminių antrinių antikūnų reakcijų.
02 pav. Netiesioginis ELISA testas
Kuo skiriasi tiesioginis ir netiesioginis ELISA?
Tiesioginis prieš netiesioginį ELISA |
|
| Tiesioginė ELISA yra mažiau jautri, palyginti su netiesiogine ELISA. | Netiesioginis ELISA tyrimas yra jautresnis. |
| Sugautas laikas | |
| Tiesioginis ELISA testas yra greitas procesas. | Netiesioginis ELISA tyrimas užima daug laiko. |
| Antikūnų naudojimas | |
| Tiesioginėje ELISA tyrime naudojami tik vieno tipo antikūnai (pirminiai antikūnai). | Netiesioginiam ELISA tyrimui naudojami pirminiai ir antriniai antikūnai. |
| Sąsaja su fermentais | |
| Pirminiai antikūnai yra susieti su fermentais. | Antriniai antikūnai yra susieti su fermentais. |
| Antrųjų antikūnų kryžminis reaktyvumas | |
| Tiesioginė ELISA pašalina antrųjų antikūnų kryžminį reaktyvumą. | Netiesioginį ELISA tyrimą veikia kryžminis antrųjų antikūnų reaktyvumas. |
| Signalai | |
| Signalai silpni, palyginti su netiesiogine ELISA. | Signalai sustiprinami atliekant netiesioginį ELISA tyrimą. Todėl jį lengva aptikti. |
Santrauka – tiesioginis vs netiesioginis ELISA
ELISA yra biocheminis metodas, daugiausia naudojamas imunologijoje, siekiant nustatyti antikūno ar antigeno buvimą paciento kraujo mėginyje. Jis gali būti atliekamas dviem procesais, žinomais kaip tiesioginis arba netiesioginis ELISA. Tiesioginis ELISA testas naudoja tik pirminius antikūnus antigenui aptikti, o netiesioginis ELISA – tiek pirminius, tiek antrinius antikūnus. Tiesioginio ELISA metu pirminiai antikūnai yra žymimi, o netiesioginio ELISA metu antriniai antikūnai. Tai yra skirtumas tarp tiesioginio ir netiesioginio ELISA.
