Pagrindinis skirtumas – HPLC ir HPTLC
Pagrindinis skirtumas tarp HPLC ir HPTLC yra tas, kad HPLC leidžia kiekybiškai atskirti komponentus mėginyje, o HPTLC neleidžia kiekybiškai atskirti komponentų mėginyje.
Chromatografija yra fizinio atskyrimo metodas, naudojamas atskirti ir identifikuoti mišinio komponentus. Tiek HPLC, tiek HPTLC yra chromatografijos metodai. HPLC yra didelio efektyvumo skysčių chromatografija. HPTLC yra didelio efektyvumo plonasluoksnė chromatografija.
Kas yra HPLC?
HPLC yra didelio efektyvumo skysčių chromatografija. Tai analizės metodas, naudojamas mišinio komponentams atskirti, identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti. Taikant šį metodą, mėginys ištirpinamas tinkamame tirpiklyje. Tada tirpiklis su mėginiu praleidžiamas per tam tikro slėgio siurblį. Siurblys užpildytas kieta adsorbuojančia medžiaga. Tada kai kurie komponentai stipriai jungiasi su sugeriančia medžiaga, o kiti komponentai jungiasi silpnai. Dėl to komponentai turi skirtingą srautą per siurblį. Todėl komponentus galima lengvai atskirti.
01 pav.: HPLC sistema
Siurblį užpildanti adsorbentinė medžiaga vadinama stacionariąja faze. Tirpiklis su ištirpusiu mėginiu vadinamas judriąja faze. Šioje technikoje naudojamas siurblys vadinamas stulpeliu. Kolonėlė užpildyta adsorbuojančia medžiaga, dažniausiai silicio dioksido dalelėmis. Šių dalelių dydis gali svyruoti nuo 2 iki 50 μm. Atskyrimo procesą įtakoja judriosios fazės sudėtis ir sistemos temperatūra. Sąveika tarp stacionarios fazės ir komponento mėginyje gali būti hidrofobinė sąveika, dipolio ir dipolio sąveika, joninis ryšys ir kt.
HPLC darbinis slėgis yra daug didesnis nei tradicinės skysčių chromatografijos. Jis yra apie 50-350 barų. Skirtumas tarp skysčių chromatografijos ir HPLC yra tas, kad skysčių chromatografijoje mėginys patenka per kolonėlę veikiant gravitacijai, o HPLC atveju mėginys yra slėgis per kolonėlę. Kolonėlės dydis ir absorbuojančios dalelės taip pat yra labai mažos, palyginti su tradicine skysčių chromatografija. Tačiau HPLC metodu suteikiama skiriamoji geba yra geresnė.
Kas yra HPTLC?
HPTLC yra didelio efektyvumo plonasluoksnė chromatografija. Tai pažangi ir automatizuota tradicinio TLC forma. Ši technika užtikrina efektyvų sprendimą per trumpą laiką. Taikant šį analizės metodą, mėginys ir etaloninė medžiaga gali būti analizuojami vienu metu, o tai leidžia lyginti mėginį su etalonu. Tai suteikia geresnį analitinį tikslumą nei kiti chromatografiniai metodai. Analizės laikas yra trumpesnis. Ši technika yra nebrangi technika.
02 pav.: maistinių dažų analizė naudojant HPTLC
HPLC metodas yra paprastas procesas, o mėginio paruošimo etapas taip pat pašalinamas (tradicinėje TLC mėginio paruošimo etapas įtraukiamas prieš atskyrimą. Šis etapas apima valymą ir sodrinimą). Tirpiklis gali būti naudojamas tiesiogiai be jokio išankstinio apdorojimo, nors naudojant kitus chromatografinius metodus reikia išankstinio apdorojimo, pvz., degazavimo, filtravimo ir kt.
HPTLC naudojama adsorbentinė medžiaga yra silicio dioksidas, kurio dalelės yra labai mažos. Taikant tradicinį TLC, silicio dioksido dalelių dydis yra 5–20 μm, o HPTLC – 4–8 μm. Mėginys uždedamas ant HPTLC plokštelės naudojant aplikatorių. Tai užtikrina vienodą ir saugų pritaikymą. Tada plokštelės dedamos į kamerą, kurioje yra juda fazė. Kamera turi būti prisotinta judriosios fazės garų. Po HPTLC proceso galima aptikti pajudėjusias dėmes. Kai aptinkamos dėmės ant plokštelės, HPTLC metodas naudoja tinkamą UV sritį arba jodo kamerą.
Kuo skiriasi HPLC ir HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC yra didelio efektyvumo skysčių chromatografija. | HPTLC yra didelio efektyvumo plonasluoksnė chromatografija. |
| Technika | |
| Atliekant HPLC, judri fazė su tirpikliu praleidžiama per kolonėlę, užpildytą nejudančia faze. | Atliekant HPTLC, mėginys uždedamas ant TLC plokštelės ir įdedamas į kamerą, kurioje yra judrioji fazė; tada mėginiui leidžiama migruoti aukštyn plokštele kartu su judančia faze. |
| Matavimas | |
| Naudojant HPLC, komponentų srauto per kolonėlę skirtumai naudojami komponentams iš mėginio atskirti. | Naudojant HPTLC, kiekvieno imties komponento nuvažiuotų atstumų skirtumai naudojami mėginio komponentams atskirti. |
| Kiekybinis atskyrimas | |
| HPLC leidžia kiekybiškai atskirti komponentus mėginyje. | HPTLC neleidžia kiekybiškai atskirti komponentų mėginyje. |
Santrauka – HPLC vs HPTLC
HPLC ir HPTLC yra du chromatografijos metodai. Pagrindinis skirtumas tarp HPLC ir HPTLC yra tas, kad HPLC leidžia kiekybiškai atskirti komponentus mėginyje, o HPTLC neleidžia kiekybiškai atskirti komponentų mėginyje.
