Pagrindinis skirtumas tarp RP HPLC ir HIC yra tas, kad RP HPLC naudojama labiau polinė juda fazė ir mažiau polinė stacionari fazė. Tuo tarpu HIC naudojama hidrofobinė stacionari fazė, leidžianti prie jos prisijungti hidrofobinėms molekulėms.
Chromatografija yra analizės metodas, padedantis atskirti mišinį į jo komponentus. Pirmiausia turime ištirpinti mėginį, kurį reikia atskirti į tirpalą. Šis tirpalo ir medžiagos mišinys vadinamas judriąja faze. Tada mobilioji fazė praeina per kitą medžiagą, vadinamą stacionaria faze. Stacionari fazė lemia komponentų atskyrimą. Atskyrimas įvyksta dėl medžiagos pasiskirstymo tarp judriosios ir stacionarios fazės.
Kas yra RP HPLC?
Terminas RP HPLC reiškia atvirkštinės fazės didelio efektyvumo skysčių chromatografiją. Tai apima mišinio komponentų atskyrimą pagal hidrofobiškumą. Hidrofobiniai komponentai judrioje fazėje jungiasi su imobilizuotais hidrofobiniais ligandais nejudančioje fazėje, o hidrofiliniai komponentai eliuuoja per stacionarią fazę neprisirišdami prie nejudančios fazės paviršiaus.
01 pav.: HPLC aparatas
Be to, šis metodas yra labiau atkuriamas, palyginti su kitais chromatografijos metodais, ir jis taip pat yra plačiai pritaikytas. Todėl šį metodą naudojame laboratorijose daugiau nei 75% visų HPLC metodų. Dažniausiai kaip judriąją fazę naudojame vandeninį vandens mišinį su besimaišančiu poliniu organiniu tirpikliu. Taigi jis užtikrins tirpalo hidrofobinių komponentų pritvirtinimą prie nejudančios fazės paviršiaus.
Kas yra HIC?
Terminas HIC reiškia hidrofobinės sąveikos chromatografiją. Tai atvirkštinės fazės HPLC tipas, ir šis metodas daugiausia naudojamas didelėms biomolekulėms, tokioms kaip b altymai, atskirti. Taikant šį metodą, biomolekulės mėginiui pagaminti turime naudoti vandeninę terpę. Taip yra todėl, kad organiniai tirpikliai gali sukelti b altymų denatūravimą. Be to, šis metodas naudoja sąveiką tarp didelių molekulių su šiek tiek hidrofobiniu stacionarios fazės paviršiumi. Be to, mėginyje turime naudoti didelę druskos koncentraciją, nes tai skatina b altymo išlikimą ant pakuotės; šis procesas vadinamas išsūdymu. Palaipsniui mažindami druskos koncentraciją, galime priversti biomolekules eliuuoti atskirai pagal jų hidrofobiškumą.
Paprastai šiuo metodu naudojamos sąlygos, priešingos jonų mainų chromatografijai. Taikant šį metodą, pirmiausia turime praleisti buferinį tirpalą per kolonėlę, kad sumažintume tirpios medžiagos tirpimą mėginyje. Tai leidžia atskleisti hidrofobines b altymo sritis. Tačiau, kai molekulė yra labiau hidrofobiška, norint paskatinti surišimą, reikia mažiau druskos. Čia pirmiausia išplaunami mažiau hidrofobiniai tirpalai, o atsižvelgiant į druskos koncentracijos pokyčius, daugiau hidrofobinių medžiagų išplaunamos paskutinės.
Kuo skiriasi RP HPLC ir HIC?
Chromatografija yra analizės metodas, skirtas atskirti mišinio komponentus. RP HPLC ir HIC yra du specializuoti chromatografijos metodai. Pagrindinis skirtumas tarp RP HPLC ir HIC yra tas, kad RP HPLC naudojama labiau polinė judri fazė ir mažiau polinė stacionari fazė, o HIC naudojama hidrofobinė stacionari fazė, kuri leidžia prie jos prisijungti hidrofobinėms molekulėms.
Toliau pateiktoje infografijoje apibendrinamas skirtumas tarp RP HPLC ir HIC.
Santrauka – RP HPLC vs. HIC
Chromatografija yra analizės metodas, skirtas atskirti mišinio komponentus. RP HPLC ir HIC yra du specializuoti chromatografijos metodai. Pagrindinis skirtumas tarp RP HPLC ir HIC yra tas, kad RP HPLC naudojama labiau polinė judri fazė ir mažiau polinė stacionari fazė, o HIC naudojama hidrofobinė stacionari fazė, kuri leidžia prie jos prisijungti hidrofobinėms molekulėms.
