Pagrindinis skirtumas – horizontali ir vertikali gelio elektroforezė
Gelio elektroforezė yra laboratorinė technika, naudojama genetikoje, siekiant atskirti mišinius, kuriuose yra DNR, RNR ir kitų b altymų pagal jų atitinkamą krūvį ir molekulinį dydį. DNR, RNR arba b altymai, kuriuos reikia atskirti šiuo metodu, perleidžiami per gelį, kuriame yra mažų porų. Molekules per gelį varo elektrinis laukas. Molekulės praeina pro gelio poras, o judėjimo greitis yra atvirkščiai proporcingas atitinkamam jų ilgiui. Todėl mažesnio molekulinio dydžio molekulės judės greičiau nei didesnės molekulinės masės molekulės. Elektrinis laukas susidaro dėl krūvio skirtumo dviejuose gelio galuose. Viename gale yra teigiamas krūvis, o kitame - neigiamas krūvis. Kadangi DNR ir RNR molekulės yra neigiamai įkrautos, jos bus pritrauktos link teigiamai įkrauto gelio galo. Gelio elektroforezė gali būti dviejų skirtingų metodų: horizontalioji gelio elektroforezė ir vertikali gelio elektroforezė. Atliekant horizontaliąją gelio elektroforezę, gelis yra horizontaliai ir panardinamas į nuolatinį buferį, esantį pačioje gelio dėžutėje. Atliekant vertikalią gelio elektroforezę, buferio sistema yra nukreipta vertikaliai ir yra nepertraukiama, o viršuje ir apačioje yra dvi kameros su katodu ir anodu. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.
Kas yra horizontali gelio elektroforezė?
Horizontalioje gelio elektroforezėje naudojama pagrindinė DNR, RNR arba b altymų molekulių atskyrimo pagal jų atitinkamą molekulinį dydį ir krūvį teorija. Taikant šį metodą, gelis yra horizontaliai ir panardinamas į nuolatinį buferį. Agarozės gelis naudojamas gelio dėžutei atskirti į du skyrius. Viename gelio dėžutės gale yra anodas, o kitame gale yra katodas. Kai taikoma srovė, šioje technikoje naudojamas buferis leidžia sukurti įkrovos gradientą. Kai įkraunama, gelis linkęs įkaisti. Buferis taip pat veikia kaip aušinimo skystis, kuris palaiko optimalią temperatūrą. Bėgimo buferio recirkuliacija neleidžia susidaryti pH gradientui. Nepertraukiamo buferio sistemos negalima naudoti atliekant horizontalią gelio elektroforezę, nes du gelio sistemos skyriai yra sujungti su veikiančiu buferiu. Akrilamidas naudojamas gelio elektroforezės metu b altymų mišiniams atskirti.
01 pav.: Horizontali gelio elektroforezė
Atliekant horizontalią gelio elektroforezę, akrilamido naudoti negalima, nes gelio dėžutė yra veikiama deguonies. Dėl deguonies yra slopinama akrilamido polimerizacija, o tai trukdo susidaryti geliui. Horizontali gelio elektroforezė – tai lengvas metodas, naudojamas DNR ir RNR atskyrimui.
Kas yra vertikali gelio elektroforezė?
Vertikalios gelio elektroforezės technika veikia pagal pirminę gelio elektroforezės teoriją, tačiau laikoma, kad ji yra sudėtingesnė nei horizontalioji gelio elektroforezės metodas. Ši technika naudoja nepertraukiamą buferį. Katodas yra viršutinėje kameroje, o anodas yra apatinėje kameroje. Kiekviename skyriuje esantys elektrodai sukuria reikiamą elektrinį lauką. Tarp dviejų sumontuotų stiklo plokščių užpilamas plonas gelio sluoksnis. Todėl viršutinė gelio dalis panardinama į viršutinę kamerą, o apatinė gelio dalis panardinama į kamerą apačioje. Įjungus srovę, nedidelė buferio dalis juda į apatinę kamerą iš viršutinės kameros per gelį. Šioje technikoje naudojama srovė yra minutės vienetų.
02 pav.: Vertikali gelio elektroforezė
Vertikalios gelio elektroforezės metu buferis teka tik per gelį. Tai leidžia tiksliai valdyti įtampos gradientą atskyrimo etape. Galima naudoti akrilamido gelį, nes skyriai nėra veikiami atmosferos deguonies. Dėl mažesnio akrilamido gelio porų dydžio galima pasiekti tikslų atskyrimą naudojant didesnę skiriamąją gebą.
Kokie yra horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės panašumai?
- Abi sistemos veikia pagal pagrindinę gelio elektroforezės teoriją.
- Anodas ir katodas naudojami reikalingam elektriniam laukui užtikrinti abiejose sistemose.
Kuo skiriasi horizontali ir vertikali gelio elektroforezė?
Horizontali ir vertikali gelio elektroforezė |
|
| Horizontali gelio elektroforezė yra gelio elektroforezės metodas, kai gelis yra horizontaliai. | Vertikali gelio elektroforezė yra gelio elektroforezės metodas, kai gelis orientuojamas vertikaliai. |
| Buferis | |
| Horizontalioji gelio elektroforezė susideda iš nuolatinio buferio. | Vertikalios gelio elektroforezės metu bėgimo buferis nepertraukiamas. |
| Akrilamido naudojimas | |
| Akrilamido negalima naudoti horizontaliai gelio elektroforezei, nes gelio dėžutė yra veikiama atmosferos deguonies. | Kadangi gelis nėra veikiamas atmosferos deguonies dėl dviejų atskirų kamerų, akrilamidas gali būti naudojamas vertikaliai gelio elektroforezei. |
| Funkcija | |
| Horizontalioji gelio elektroforezė dažniau naudojama DNR ir RNR mišiniams, bet ne b altymams atskirti. | Vertikali gelio elektroforezė naudojama b altymų mišiniams atskirti. |
Santrauka – horizontali ir vertikali gelio elektroforezė
Gelio elektroforezė yra laboratorinė technika, plačiai naudojama atskiriant mišinius, kuriuose yra DNR, RNR ir b altymų molekulių. Yra du gelio elektroforezės būdai: horizontali ir vertikali gelio elektroforezė. Atliekant horizontalią gelio elektroforezę, buferis yra nenutrūkstamas, o vertikalios gelio elektroforezės metu jis yra nepertraukiamas. Tai yra skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės. Abi sistemos veikia pagal bendrą gelio elektroforezės principą.
Atsisiųskite horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.
