Pagrindinis skirtumas – sudėjimo gelis ir atskiriamasis gelis
Sąvokos „stacking gelis“ir „atskyrimo gelis“vartojamos aiškinant SDS-PAGE techniką. SDS-PAGE arba natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezė yra laboratorinė technika, naudojama b altymų molekulėms atskirti pagal jų molekulinę masę. Šios technikos teorija yra ta, kad skirtingos molekulinės masės b altymai turi skirtingą migracijos greitį; mažos molekulinės masės molekulės migruoja greičiau, o didelės molekulinės masės molekulės migruoja lėtai. Migracijos terpė yra gelis. Yra dviejų tipų geliai, vadinami stacking geliu ir atskiriamuoju geliu. Pagrindinis skirtumas tarp gelio ir atskyrimo gelio yra tas, kad sukrauto gelio pH yra 6,8, o skiriamojo gelio pH yra 8,8.
Kas yra Stacking Gel?
Stacking gelis yra mažai koncentruotas poliakrilamido gelis, kuris dedamas ant labiau koncentruoto skiriamojo gelio (atskyrimo gelio) viršaus, naudojant SDS-PAGE techniką. Stacking gelis yra naudojamas pagerinti elektroforezės skiriamąją gebą. Skiriamoji geba padidėja dėl skirtumo tarp susikaupusio gelio ir skiriamojo gelio koncentracijų, turinčių įtakos mėginio b altymams. Kadangi poliakrilamido koncentracija stacking gelyje yra maža, porų dydis yra didesnis. Tai taip pat padeda padidinti atskyrimą.
Stacking gelis yra birus poliakrilamido gelis su didelėmis poromis apie 7 % poliakrilamido. Šios poros neveikia kaip didelis barjeras didelėms b altymų molekulėms. Taigi šis gelis šiek tiek veikia šių b altymų mobilumą. Tai leidžia atskirti b altymus pagal mobilumą ir dydį, koncentruojant juos tarp dviejų gelių.
01 pav.: SDS-PAGE Akrilamido gelis
Stacking gelio pH yra 6,8. Jo pH yra rūgštus nei gelio tirpimo 2 pH vienetais. Šis pH reiškia mažesnę jonų stiprumą, taigi ir didesnę elektrinę varžą. Tai skatina b altymų mobilumą nei kitos įkrautos dalelės, esančios gelyje.
Kas yra atskyrimo gelis?
SDS-PAGE technikos atskyrimo gelis arba tirpinamasis gelis yra labai koncentruotas poliakrilamido gelis, dedamas ant žemos koncentracijos gelio viršaus. Atskyrimo gelyje yra daug poliakrilamido (10%). Šio gelio pH palaikomas kaip 8,8, o tai yra aukštesnis pH lygis nei sukrauto gelio.
02 pav.: Gelio elektroforezės aparatas
Kai b altymų molekulės pasiekia atskyrimo gelį, tų molekulių migracija sulėtėja, nes atskiriamasis gelis yra didelės koncentracijos gelis su mažų porų dydžiu, kuris gali veikti kaip didelis barjeras b altymų molekulėms judėti.. Šis sulėtėjimas leidžia kitiems lėtai migruojantiems b altymams pasivyti, todėl tarp dviejų gelių susidaro siaura, koncentruota juosta.
Koks yra ryšys tarp gelio sudėjimo ir gelio atskyrimo?
Tame pačiame aparate naudojami ir stacking Gel, ir Separating Gel tipai
Koks skirtumas tarp sudėjimo gelio ir atskiriamo gelio?
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Stacking gelis yra mažai koncentruotas poliakrilamido gelis, kuris dedamas ant labiau koncentruoto skiriamojo gelio (atskyrimo gelio) viršaus, naudojant SDS-PAGE metodą. | SDS-PAGE technikos atskyrimo gelis arba tirpinamasis gelis yra labai koncentruotas poliakrilamido gelis, dedamas ant mažai koncentruoto gelio viršaus. |
| Vieta | |
| Stacking gelis uždedamas ant tirpstančio (atskiriančio) gelio. | Atskiriamasis gelis dedamas ant indo, naudojamo gelio elektroforezei, dugno. |
| Koncentracija | |
| Stacking gelio koncentracija yra didelė. | Skyriančiojo gelio koncentracija yra maža. |
| Poliakrilamido turinys | |
| Stacking gelyje yra apie 7 % poliakrilamido. | Skyriamajame gelyje yra apie 10 % poliakrilamido. |
| pH | |
| Kraunamo gelio pH yra 6,8. | Skyriančiojo gelio pH yra 8,8. |
| Porų dydis | |
| Didelių porų dydžiai sukrautame gelyje. | Atskiriamajame gelyje yra mažų porų. |
| Rezoliucija | |
| Stacking gelis suteikia geresnę skiriamąją gebą. | Atskiriantis gelis suteikia prastą skiriamąją gebą. |
Santrauka – sujungimo gelis ir atskiriamasis gelis
Stacking gelis ir atskiriamasis gelis yra dviejų tipų poliakrilamido geliai, naudojami siekiant geriau atskirti b altymų molekules tam tikrame mėginyje. Skirtumas tarp sukraunamo gelio ir atskyrimo gelio yra tas, kad sukraunamo gelio pH yra 6,8, o skiriamojo gelio pH yra 8,8.
