Pagrindinis skirtumas – imunofluorescencija ir imunohistochemija
Ligų diagnostika, kurioje naudojami molekuliniai biologiniai metodai, tapo nauja klinikinės laboratorinės technologijos sritimi. Tai apima visus tyrimus ir metodus, leidžiančius nustatyti ligą ir suprasti ligos priežastį, analizuojant DNR, RNR ar išreikštus b altymus organizme. Sparti molekulinės diagnostikos pažanga leido atlikti pagrindinius užkrečiamųjų ir neužkrečiamųjų ligų tyrimus. Jie naudojami norint nustatyti svarbių genų ar b altymų, susijusių su liga, sekos arba ekspresijos lygių pokyčius. Imunofluorescencija (IF) ir imunohistochemija (IHC) yra du tokie plačiai naudojami vėžio biologijos metodai. IF yra IHC tipas, kai monokloniniams ir polikloniniams antikūnams analizuoti naudojamas fluorescencinis aptikimo metodas, o IHC naudoja cheminius metodus monokloniniams ir polikloniniams antikūnams aptikti. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp IF ir IHC.
Kas yra imunofluorescencija (IF)?
Imunofluorescencija yra aptikimo metodas, kai tyrime naudojami antikūnai yra paženklinami naudojant fluorescencinius dažus arba fluorescuojančius b altymus. Paženklinti antriniai antikūnai gali sukelti nepageidaujamus foninius signalus; todėl IF technika šiuo metu yra pagrįsta paties pirminio antikūno žymėjimu, kad būtų išvengta nepageidaujamų signalų aptikimo metu. Taikant šį metodą, užkertamas kelias nespecifiniam pirminio ir antrinio antikūno jungimuisi ir jis vyksta greičiau, nes nėra antrinio inkubavimo etapo. Taip pat pagerėjo duomenų kokybė.
01 pav. Dvigubas BrdU, NeuN ir GFAP dažymas imunofluorescenciniu būdu
Fluorochromai arba fluorescenciniai dažai yra junginiai, galintys sugerti spinduliuotę, geriausia sužadintą ultravioletinę spinduliuotę. Kai dalelės pasiekia pradinę būseną iš sužadintos būsenos, jos skleidžia spinduliuotę, kurią fiksuoja ir aptinka detektorius, kad sudarytų spektrą. Labai svarbu, kad fluorescencinė etiketė būtų suderinama ir stabili konkrečioje reakcijoje ir kad ji būtų tinkamai konjuguota su antikūnu, kad būtų gauti tikslūs rezultatai. Vienas iš dažniausiai naudojamų fluorochromų yra fluoresceino izotiocianatas (FITC), kuris yra žalios spalvos, kurio absorbcijos ir emisijos didžiausias bangos ilgis yra atitinkamai 490 nm ir 520 nm. Rodaminas, kitas IF naudojamas agentas, yra raudonos spalvos, o sugerties ir emisijos didžiausi bangos ilgiai yra 553 nm ir 627 nm.
Kas yra imunohistochemija (IHC)?
IHC yra molekulinio tyrimo metodas, naudojamas siekiant nustatyti ir patvirtinti antigeno buvimą tikslinėje ląstelėje. Tikslinė ląstelė gali būti infekcinė dalelė, mikrobų patogenas arba piktybinė naviko ląstelė. IHC naudoja monokloninius ir polikloninius antikūnus, kad nustatytų antigenų, esančių tikslinių ląstelių paviršiuje, buvimą. Metodas pagrįstas antigeno ir antikūnų surišimu. Aptikimo žymeklis yra konjuguotas prie šių antikūnų, kad būtų galima nustatyti konkretaus antigeno buvimą arba nebuvimą. Šie žymenys gali būti cheminiai žymenys, pvz., fermentai, fluorescenciniu būdu pažymėti antikūnai arba radioaktyviai pažymėti antikūnai.
02 pav. Pelės smegenų skiltelė, nudažyta imunohistochemijos metodu
Populiariausias IHC taikymas yra vėžio ląstelių biologijoje, siekiant nustatyti piktybinių navikų buvimą, tačiau jis taip pat naudojamas infekcinėms ligoms nustatyti.
Kokie yra imunofluorescencijos ir imunohistochemijos panašumai?
- Imunofluorescencija ir imunohistochemija vyksta in vitro sąlygomis.
- Abu metodai pagrįsti antigenu-antikūnu
- Abu yra labai greiti metodai.
- Metodikų rezultatai yra atkuriami.
- Abu turi geresnę duomenų kokybę.
- Šie metodai naudojami vėžio ir infekcinių ligų diagnostikoje.
Kuo skiriasi imunofluorescencija ir imunohistochemija?
Imunofluorescencija prieš imunohistochemiją |
|
| IF yra aptikimo metodas, kai tyrime naudojami antikūnai yra paženklinami aptikimui naudojant fluorescencinius dažus arba fluorescencinius b altymus. | IHC yra aptikimo metodas, kai tyrime naudojami antikūnai yra paženklinami aptikimui naudojant chemines medžiagas arba radioaktyvius elementus. |
| Tikslumas | |
| If technikos tikslumas yra didesnis, palyginti su IHC. | IHC tikslumas mažesnis. |
| Specifiškumas | |
| IF yra konkretesnis. | IHC yra mažiau konkretus. |
Santrauka – imunofluorescencija ir imunohistochemija
Molekuliniai mechanizmai sukėlė daug pokyčių medicinos srityje, paskatino pažangius molekulinio tyrimo metodus, kurie sukėlė revoliuciją diagnostikos srityje. Šie išradimai leido greitai ir tiksliai nustatyti ir patvirtinti ligą, o tai leido sėkmingai skirti ir gaminti vaistus. Šie metodai taip pat naudojami farmakologijoje, siekiant surasti vaistų taikinius ir patvirtinti vaisto farmakokinetines savybes vaistų metabolizmo metu. IF ir IHC yra du diagnostikos metodai, pagrįsti antigeno ir antikūnų surišimo koncepcija, nors abiejų metodų aptikimo būdas skiriasi. IF naudoja fluorescencijos principą, kad aptiktų antigeną, o IHC naudoja cheminės konjugacijos koncepciją, kad aptiktų antigeną. Tai yra skirtumas tarp IF ir IHC.
Atsisiųsti imunofluorescencijos ir imunohistochemijos PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp imunofluorescencijos ir imunohistochemijos.
