Pagrindinis skirtumas tarp tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos yra tas, kad atliekant tiesioginę imunofluorescenciją naudojamas vienas antikūnas, kuris veikia prieš dominantį taikinį, o netiesioginė imunofluorescencija naudoja du antikūnus dominančiam taikiniui pažymėti.
Imunofluorescencija arba ląstelių vaizdavimas yra metodas, naudojamas specifiniam tiksliniam antigenui pažymėti fluoroforu. Čia fluoroforas yra fluorescencinis cheminis junginys, kuris gali pakartotinai skleisti šviesą sužadinus šviesą. Kai fluoroforas jungiasi su tiksliniu antigenu, tai leidžia aptikti tikslinę molekulę mėginyje. Norėdami tai apibūdinti toliau, kai antigenas jungiasi su specifiniu antikūnu, jis gali būti konjuguotas su fluoroforais. Taigi, stebint fluorescenciniu mikroskopu, nesunku aptikti tikslinio antigeno buvimą mėginyje.
Be to, yra dviejų tipų imunofluorescencija; tiesioginė ir netiesioginė imunofluorescencija. Skirtumas tarp tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos daugiausia priklauso nuo naudojamų antikūnų skaičiaus ir fluoroforo konjugacijos. Tai yra, esant tiesioginei imunofluorescencijai, fluoroforas tiesiogiai konjuguojasi su pirminiu antikūnu, o netiesioginės imunofluorescencijos atveju fluoroforas konjugatas su antriniu antikūnu.
Kas yra tiesioginė imunofluorescencija?
Imunofluorescencija naudoja antikūnus specifiniams tiksliniams antigenams aptikti. Tiesioginė imunofluorescencija yra vienas iš dviejų imunofluorescencijos tipų. Esant tiesioginei imunofluorescencijai, dalyvauja vienas antikūnas (pirminis antikūnas), o fluoroforas tiesiogiai konjuguoja su pirminiu antikūnu. Sujungus antikūną su tiksliniu antigenu, fluoroforas skleidžia fluorescenciją, kurią galima aptikti fluorescenciniu mikroskopu.
01 pav.: Tiesioginė imunofluorescencija
Tačiau tiesioginė imunofluorescencija yra brangus metodas, nes pirminiai konjuguoti antikūnai yra brangūs, palyginti su antriniais antikūnais. Nepaisant to, tai neapima papildomo žingsnio, taigi, trumpesnė technika. Be to, nespecifiniai surišimai sumažėja esant tiesioginei imunofluorescencijai. Taigi rūšių kryžminis reaktyvumas yra mažas. Tačiau aptikimo metu tiesioginės imunofluorescencijos jautrumas yra silpnas, palyginti su netiesiogine imunofluorescencija.
Kas yra netiesioginė imunofluorescencija?
Netiesioginė imunofluorescencija yra antrasis imunofluorescencijos tipas, apimantis dviejų tipų antikūnus, tokius kaip pirminiai ir antriniai antikūnai, žymint tikslinį antigeną. Taikant šį metodą, fluoroforas konjuguoja su antriniu antikūnu. Taigi šis metodas apima papildomą veiksmą.
02 pav.: Imunofluorescencija
Tačiau naudojant šį metodą jautrumas yra didelis, nes keli fluoroforai gali būti konjuguoti su antriniais antikūnais ir tai palengvina aptikimą. Be to, netiesioginė imunofluorescencija yra pigesnė dėl to, kad antrinių antikūnų konjugacija yra pigesnė ir lengvesnė. Palyginti su tiesiogine imunofluorescencija, rūšių kryžminis reaktyvumas taikant netiesioginį metodą yra didelis.
Kokie yra tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos panašumai?
- Tai yra dviejų tipų imunofluorescencijos metodai.
- Pirminiai antikūnai ir fluoroforas apima abu metodus.
- Be to, antigeno ir antikūno reakcija vyksta taikant abu metodus.
- Be to, tiek tiesioginei, tiek netiesioginei imunofluorescencijai antigenui aptikti naudojamas fluorescencinis mikroskopas.
Kuo skiriasi tiesioginė ir netiesioginė imunofluorescencija?
Imunofluorescencija gali būti tiesioginė arba netiesioginė, pagrįsta fluoroforo konjugacija su naudojamais antikūnais. Esant tiesioginei imunofluorescencijai, fluoroforas konjuguoja su pirminiu antikūnu, kuris yra vienintelis antikūnas, naudojamas naudojant šią techniką. Priešingai nei netiesioginės imunofluorescencijos atveju, fluoroforas konjuguoja su antriniu antikūnu, kuris yra vienas iš dviejų antikūnų tipų, naudojamų naudojant šią techniką. Taigi pagrindinis skirtumas tarp tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos yra antikūnų tipas, kuris konjuguoja su fluoroforu.
Toliau pateiktoje infografikoje pateikiamas tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos skirtumo palyginimas.
Santrauka – tiesioginė ir netiesioginė imunofluorescencija
Imunofluorescencija yra metodas, naudojamas specifinių antigenų buvimui mėginyje nustatyti. Šis metodas naudoja specifinius antikūnus. Todėl antikūnai konjuguojasi su fluoroforais, kad juos aptiktų naudojant fluorescencinį mikroskopą. Be to, yra dviejų tipų imunofluorescencija, būtent tiesioginė ir netiesioginė imunofluorescencija. Tiesioginė imunofluorescencija apima vieną antikūną ir fluoroforą, tiesiogiai konjuguotą su šiuo antikūnu. Netiesioginė imunofluorescencija apima du antikūnus; pirminis ir antrinis bei fluoroforas, konjuguotas su antriniu antikūnu. Kadangi keli antriniai antikūnai gali prisijungti prie pirminio antikūno, o keli fluoroforai gali konjuguoti su antriniais antikūnais, netiesioginė imunofluorescencija yra jautresnis metodas nei tiesioginis metodas. Be to, netiesioginis metodas yra pigesnis nei tiesioginis. Taigi, tai yra skirtumas tarp tiesioginės ir netiesioginės imunofluorescencijos.
