Pagrindinis skirtumas – Gramo dėmės ir atsparūs rūgštims
Bakterijos yra labai maži mikroorganizmai. Jie yra skaidrūs, juos sunku aptikti gyvomis ir nedažomis sąlygomis. Taigi, siekiant palengvinti bakterijų aptikimą, kuriami įvairūs dažymo metodai. Yra trys pagrindiniai dažymo būdai: paprastas dažymas, diferencinis dažymas ir struktūrinis dažymas. Diferencinis dažymas yra metodas, kai bakterijoms atskirti naudojamas daugiau nei vienas dažymas. Gramo beicas ir rūgščiai atsparus beicas dažniausiai žinomi kaip diferencinės beicas. Gram dažymas yra diferencinio dažymo metodas, kuris suskirsto bakterijas į dvi grupes, žinomas kaip gramteigiamos ir gramneigiamos bakterijos. Rūgščiai atsparus beicas yra diferencinis dažymas, naudojamas rūgštims atspariems organizmams, tokiems kaip Mycobacterium, atpažinti nuo rūgštims atsparių organizmų. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp „Gram“ir „Acid Fast“dažų.
Kas yra „Gram Stain“?
Gramų dažymas yra svarbus diferencinio dažymo metodas, naudojamas bakterijoms identifikuoti mikrobiologijoje. Šį metodą 1884 m. pristatė danų bakteriologas Hansas Christianas Gramas. Gram dažymas suskirsto bakterijas į dvi pagrindines grupes – gramteigiamas ir gramneigiamas, kurios yra labai svarbios klasifikuojant ir identifikuojant bakterijas. Mikrobiologai savo studijų metu atlieka dažymą gramais kaip pradinį bakterijų apibūdinimo žingsnį.
Bakterijos grupuojamos pagal jų ląstelės sienelės skirtumus. Gramteigiamos bakterijos susideda iš storo peptidoglikano sluoksnio jų ląstelės sienelėje, o gramneigiamos bakterijos – iš plono peptidoglikano sluoksnio jų ląstelės sienelėje. Dažymo gramais rezultatas bus pagrįstas ląstelės sienelės peptidoglikano sluoksnio storio skirtumu.
Gramų dažymas atliekamas naudojant keturis skirtingus reagentus, būtent; pirminis beicas, kandiklis, spalvą mažinantis agentas ir priešingas beicas. Krištolinė violetinė ir safraninas yra naudojami atitinkamai kaip pirminės ir priešinės dėmės, o gramai jodo ir 95% alkoholio naudojami atitinkamai kaip kandiklis ir baliklis. Pagrindiniai gramų dažymo žingsniai yra tokie;
- Bakterijų tepinėlis paruošiamas ant švaraus stiklelio, fiksuojamas termiškai ir atšaldomas.
- Tepinėlis 1–2 minutes užliejamas krištoliniu violetiniu.
- Tepinėlis nuplaunamas lėtai tekančiu vandeniu iš čiaupo, kad būtų pašalintos dėmės.
- Ant tepinėlio 1 minutę užtepama gramų jodo.
- Tepinėlis nuplaunamas lėtai tekančiu vandeniu iš čiaupo
- Tepinėlis plaunamas 95 % alkoholiu 2–5 sekundes ir nuplaunamas lėtai tekančiu vandeniu iš čiaupo.
- Tepinėlis 1 minutę nudažomas safraninu
- Tepinėlis nuplaunamas lėtai tekančiu vandeniu iš čiaupo, išdžiovinamas ir stebimas po mikroskopu.
Gram dėmės pabaigoje gramneigiamos bakterijos bus pastebėtos rausvos spalvos, o gramteigiamos bakterijos – purpurinės spalvos.
01 pav.: gramneigiamos ir gramteigiamos bakterijos
Dėmės gramais rezultatą lemia jų ląstelės sienelės peptidoglikano sluoksnio storis. Spalvos šalinimo metu pirminė dėmė ir kandiklis lengvai pašalinami iš gramneigiamų bakterijų ir tampa bespalviai, nes turi ploną peptidoglikano sluoksnį. Pirminė dėmė išlieka gramteigiamose bakterijose, nes jos turi storą peptidoglikano sluoksnį. Priešdėmė nebus veiksminga gramteigiamoms bakterijoms, nes išliks pirminė dėme. Taigi gramteigiamos bakterijos bus matomos pagrindine dėmių spalva, ty purpurine spalva. Priešdėmė nudažys gramneigiamas bakterijas, kurios bus matomos pasirinkta spalva, kuri yra safranino spalva. Taigi pagal gramų dėmę lengva suskirstyti bakterijas į dvi grupes ir tai yra vertinga bakterijų diferencijavimui ir identifikavimui.
Kas yra atsparus rūgštims?
Atsparumas rūgštims yra fizinė tam tikrų bakterijų savybė, ypač jų atsparumas rūgščių išblukimui dažymo procedūrų metu. Nudažę šie organizmai atsparūs atskiestos rūgšties ir (arba) etanolio pagrindu atliekamoms spalvos pašalinimo procedūroms, įprastoms daugelyje dažymo protokolų. Taigi tiems organizmams suteiktas pavadinimas „spartus rūgštimi“. Ši savybė pasireiškia dėl to, kad jų ląstelių sienelėse yra daug vaškinės medžiagos (mikolio rūgščių). Šis testas yra labai svarbus nustatant Mycobacterium tuberculosis.
2 pav. Rūgščiai atsparios mikobakterijos
Šią rūgščiai atsparią dėmę 1882 m. sukūrė Paulas Ehrlichas. Ehrlicho rūgštimi atsparią techniką modifikavo Ziehl-Neelsen ir dabar ji naudojama dažniau. Dažymo rūgštimi procedūra apima tris skirtingus reagentus. Karbolis fuschinas naudojamas kaip pagrindinis beicas. Rūgštinis alkoholis naudojamas kaip spalvą mažinanti medžiaga. Metileno mėlyna naudojama kaip priešinė dėmė. Dažymo procedūra atliekama taip.
- Pirminė dėmė (karbolis fuksinas) užtepamas ant stiklelio fiksuoto mėginio (visos ląstelės bus nudažytos raudona spalva).
- Slidinėjimas kaitinamas garuojant 5 minutes, todėl dėmės tinkamai patenka į ląsteles.
- Tada pridedamas spalvą mažinantis tirpalas (tai pašalina raudonus dažus iš visų ląstelių, išskyrus bakterijas, kurios greitai sulaiko rūgštį).
- Metileno mėlyna pridedama kaip priešinė dėmė (jis nuspalvina visas nespalvotas bakterijų ląsteles).
- Rūgščiai atsparios bakterijos išlieka raudonos, o nerūgštinančios bakterijos nusidažo mėlynai.
Kokie yra gramo dažymo ir atsparumo rūgštims panašumai?
- Graminis dažymas ir greitas rūgštis yra du skirtingi dažymo būdai.
- Abu metodai suskirsto bakterijas į dvi grupes.
- Abu metodai naudoja du dėmes ir vieną spalvos pašalinimą.
Kuo skiriasi Gramo dažymas ir atsparumas rūgštims?
Gram dėmės prieš rūgštį atsparus |
|
| Dažymas gramais – tai diferencinio dažymo metodas, kuris suskirsto bakterijas į dvi grupes – gramteigiamus ir gramneigiamus. | Rūgščiai atsparus dažymas yra diferencinis dažymas, naudojamas rūgštims atspariems organizmams atpažinti nuo rūgštims atsparių organizmų. |
| Pagrindinė dėmė | |
| Kristalinė violetinė yra dažniausiai naudojama pagrindinė dėmė dažant gramais. | Karbolinis fuksinas yra pagrindinis beicas, naudojamas greitam rūgštingumui. |
| Bloginimo agentas | |
| 95 % alkoholio naudojamas kaip gramų dėmių spalvą mažinanti priemonė. | Rūgštinis alkoholis naudojamas kaip rūgštingumą mažinanti medžiaga. |
| Counter Stain | |
| Gram dėme kaip priešdėmė naudojamas safraninas. | |
| Pastebėjimas | |
| Gramneigiamos bakterijos stebimos pasirinktos spalvos, o gramteigiamos - purpurinės spalvos. | Rūgščiai atsparios bakterijos stebimos raudonai, o rūgštims atsparios bakterijos stebimos mėlynai. |
Santrauka – „Gram Stain“ir „Acid Fast“
Sunku vizualizuoti mikroorganizmus gyvoje būsenoje. Todėl jų savybėms tirti plačiai naudojamos biologinės dėmės ir dažymo procedūros. Diferencinis dažymas yra viena iš dažymo būdų, naudojamų bakterijoms atskirti. Gramo dažymas ir rūgštinis dažymas yra du skirtingi dažymo būdai. Gram dažymas išskiria gramneigiamas bakterijas nuo gramteigiamų bakterijų pagal jų ląstelių sienelių storį. Rūgščiai atsparus dažymas atskiria rūgščiai atsparias bakterijas nuo nerūgščiai atsparių bakterijų pagal mikolio rūgšties kiekį ląstelės sienelėje. Tai yra skirtumas tarp atsparių rūgščiai ir gramų dėmių.
Atsisiųskite „Gram Stain vs Acid Fast“PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp Gram Stain ir Acid Fast.
