Pagrindinis skirtumas – nitroceliuliozė ir nailono membrana
Blotavimas yra svarbus būdas aptikti specifines DNR, RNR ir b altymų sekas iš jų mišinių molekulinėje biologijoje. Tai atliekama naudojant membraną, vadinamą blot. Yra įvairių metodų, tokių kaip šiaurinis, pietinis ir vakarinis blotingas. Norint išvengti nespecifinio surišimo ir klaidingų aptikimų, blotavimo procesui reikia pasirinkti tinkamą membraną. Nitroceliuliozė, nailonas ir PVDF dažniausiai naudojamos blotavimo metoduose. Jie turi skirtingas savybes. Pagrindinis skirtumas tarp nitroceliuliozės ir nailono membranos yra tas, kad nitroceliuliozės membranos turi didelį b altymų imobilizacijos potencialą, o nailono membranos turi didelį nukleorūgščių imobilizacijos potencialą. Tačiau blotavimo metoduose dažnai naudojamos abiejų tipų membranos.
Kas yra nitroceliuliozės membrana?
Nitroceliuliozės membrana yra dažniausiai naudojamas membraninis filtras nukleorūgščių ir b altymų blotavimo metoduose. Jis turi didelį b altymų surišimo potencialą. Taigi nitroceliuliozės membranos plačiai naudojamos Western blot technikoje. Nitroceliuliozės membranos yra suderinamos su visais hibridizacijos metodais ir pasižymi puikiomis surišimo galimybėmis be trukdžių. Nitroceliuliozės membranos yra natūraliai hidrofilinės. Jie sudaro hidrofilinę sąveiką su molekulėmis ir efektyviai imobilizuoja jas ant membranos. Prekybinės nitroceliuliozės membranos yra dviejų dydžių: 0,45 ir 0,2 µm.
01 pav. Nitroceliuliozės membrana, naudojama Western blotinge
Kas yra nailoninė membrana?
Nailono membrana yra kita komercinės membranos rūšis, naudojama blotavimo metoduose. Jis alternatyviai naudojamas su nitroceliuliozės membranomis pietų ir šiaurės blotavimui. Nailono membranos idealiai tinka Southern blotavimui nei nitroceliuliozė, nes jos turi didelį afinitetą jungtis su DNR. Dėl kelių unikalių nailono membranų savybių mokslininkai dažniausiai naudoja nailonines membranas pietų ir šiaurės blotavimui, o ne per nitroceliuliozės membraną. Nailono membranas taip pat rekomenduojama naudoti nuėmimui ir zondavimui, skirtingai nei nitroceliuliozė.
02 pav. Nailono membrana, naudojama Southern bloting'ui
Kuo skiriasi nitroceliuliozė ir nailono membrana?
Nitroceliuliozė vs nailono membrana |
|
| Nitroceliuliozės membranos yra trapios. | Nailono membranos yra mažiau trapios. |
| Tvarkymas | |
| Jas sunku valdyti. | Juos lengva tvarkyti. |
| Reprobing | |
| Nepalaikomas nitroceliuliozės membranas sunku iš naujo patikrinti. | Pakartotinis zondavimas yra paprastas naudojant nailonines membranas. |
| Suderinamumas su įvairiomis saugojimo sąlygomis | |
| Nitroceliuliozės membranos yra mažiau atsparios įvairioms laikymo sąlygoms. | Nailono membranos tvirčiau reaguoja į įvairias laikymo sąlygas. |
| Naudoti | |
| Reikia išankstinio drėkinimo. | Iš anksto drėkinti nailono membranas nereikia. |
| Hidrofilinė gamta | |
| Nitroceliuliozės membranos yra hidrofilinės, bet mažiau hidrofilinės nei nailoninės. | Jie yra labai hidrofiliški. |
| Imobilizacijos galimybė | |
| Nitroceliuliozės membranos turi mažesnį afinitetą nukleino rūgštims. Tačiau jis turi didelį afinitetą b altymams. | Nailono membranos turi didelį jungimosi su nukleino rūgštimis potencialą nei nitroceliuliozės membranos. |
Santrauka – nitroceliuliozė prieš nailoninę membraną
Nitroceliuliozės ir nailono membranos yra specialūs lakštai, naudojami blotavimo technikoje, siekiant atkurti gelio juostų raštą. Jie suteikia galimybę aptikti konkrečią seką arba b altymą iš mišinių, imobilizuojant juos ant membranos. Kai molekulės imobilizuojamos ant membranos, ji gali būti naudojama kaip substratas hibridizacijos analizei su pažymėtais zondais. Nitroceliuliozės membrana dažniausiai naudojama b altymų aptikimui Western blot technikoje dėl didelio jungimosi afiniteto su b altymais. Nailono membranos dažnai naudojamos pietiniam ir šiauriniam blotavimui. Tai yra skirtumas tarp nitroceliuliozės ir nailono membranos.
