Transformacija prieš perkėlimą
Transformacija ir transfekcija yra du paprasti būdai, naudojami svetimam genui įvesti į šeimininko ląstelę. Tačiau šie metodai priklauso nuo pagrindinio kompiuterio ar vektorių sistemų tipo.
Kas yra ląstelių transformacija?
Transformacija yra metodas, naudojamas genams įvesti į mielių ir bakterijų ląsteles. Šis metodas paprastai sukelia paveldimus genų pokyčius, todėl geno ekspresija yra nuolatinė. Pirmą kartą bakterijų transformaciją 1928 m. pristatė Frederickas Griffithas. Tada aštuntojo dešimtmečio pradžioje ši technika buvo naudojama E.coli. E. coli transformacijos metu ląstelės mirkomos lediniame CaCl tirpale2 Šis veiksmas padaro E.coli ląsteles kompetentingomis. Po to kompetentingos ląstelės sumaišomos su plazmidine DNR ir inkubuojamos ant ledo 20-30 min. Tada suteikiamas trumpas šilumos šokas, kad DNR būtų perkelta į ląstelę. Galiausiai ląstelės dedamos į maistinių medžiagų sultinį ir inkubuojamos 37 °C temperatūroje 60–90 min., kad susidarytų plazmidės. Sėkmingai užbaigus šiuos veiksmus, transformuotos ląstelės gali būti dedamos į tinkamą terpę ląstelėms dauginti. Kadangi transformacija laikoma neefektyvia technika, ji negali būti naudojama ruošiant klonų bankus.
Kas yra ląstelių transfekcija?
Transfekcija yra svetimo geno įvedimo į žinduolių ląsteles būdas. Yra du transfekcijos būdai; būtent trumpalaikė transfekcija ir stabili transfekcija. Laikinos transfekcijos atveju genų ekspresija pasiekiama ribotą laiką; taigi geno pakitimas sukelia laikiną ekspresiją. Šis transfekcijos būdas yra paprastas ir greitas; todėl jį galima naudoti reguliariai. Vienas trumpalaikės transfekcijos trūkumas yra tai, kad sunku pritaikyti didelio masto b altymų sintezės sistemas.
Stabilios transfekcijos metu tikslinis genas integruojamas į ląstelės-šeimininkės genomą, todėl geno ekspresija yra nuolatinė, skirtingai nei laikinosios transfekcijos atveju.
Kuo skiriasi transformacija ir perkėlimas?
• Transformacija yra geno įvedimas į prokariotinę ląstelę (bakterijų ir mielių), o transfekcija paprastai vadinama geno įvedimu į žinduolių ląstelę.
• Transformacija sukelia paveldimus genų pokyčius, o transfekcija gali sukelti laikiną ekspresiją arba nuolatinius genų pokyčius.
