Pagrindinis skirtumas tarp mielių vieno hibrido ir mielių dviejų hibridų yra tas, kad mielių vienas hibridas yra in vitro pagrįstas tyrimas DNR ir b altymų sąveikai analizuoti, o mielių dviejų hibridų tyrimas yra in vitro pagrįstas b altymų ir b altymų sąveikos analizės metodas.
Ląstelių molekulių sąveikos tyrimas gali padėti nustatyti atpažinimo vietas, dalyvaujančias genų ekspresijoje ir b altymų keliuose. DNR ir b altymų sąveika yra neatsiejama nuo ląstelių procesų, tokių kaip DNR modifikacijos ir transkripcijos reguliavimas, ir kt. Kita vertus, b altymų ir b altymų sąveika atlieka gyvybiškai svarbų vaidmenį ląstelių procesuose, tokiuose kaip replikacija, transkripcija, transliacija ir signalo perdavimas. Todėl labai svarbu nustatyti šias ląstelių molekulių sąveikas atliekant skirtingus tyrimus. Mielių vienas hibridas ir mielių du hibridas yra du in vitro tyrimai, skirti analizuoti DNR ir b altymo bei b altymų ir b altymų sąveiką.
Kas yra Yeast One hibridas?
Yeast one hibridas (Y1H) yra in vitro tyrimas, skirtas tarpląstelinei DNR ir b altymo sąveikai analizuoti. Šį metodą pirmą kartą sukūrė Wang ir Reed 1993 m. Nuo tada jis parodė didesnę galią atliekant biologinius tyrimus. Šiame tyrime yra du pagrindiniai komponentai: DNR masalas ir b altymų grobis.
01 pav.: Yeast One hibridas
Procedūros metu DNR seka (DNR masalas) pirmiausia klonuojama prieš du skirtingus reporterius (HIS3, LacZ). Šios reporterio konstrukcijos yra integruotos į mielių padermės genomą. Transkripcijos faktoriai laikomi b altymų grobiu. Transkripcijos faktoriai sujungiami su mielių Gal4 transkripcijos faktoriaus transkripcijos aktyvavimo domenu (AD), kad būtų pagaminti hibridiniai b altymai. Visas hibridinis b altymas yra integruotas į plazmidę prieš įvedant jį į mielių štamą. Įvedus rekombinantinę plazmidę, kai transkripcijos faktorius sąveikauja su DNR fragmentu, AD dalis aktyvuoja reporterio geno ekspresiją (HIS3 arba LacZ). Plazmidžių sekos nustatymas leidžia nustatyti transkripcijos faktorių, kuris gali prisijungti prie DNR fragmento. Neseniai ligoms diagnozuoti buvo naudojamas mielių vienas hibridinis metodas. Todėl ateityje šis tyrimas bus plačiau naudojamas moksliniams tyrimams ir medicininiam gydymui.
Kas yra Yeast Two hibridas?
Mielių dvi hibridas (Y2H) yra in vitro tyrimas, skirtas intraląstelinių b altymų ir b altymų sąveikai analizuoti. Šį metodą iš pradžių 1989 m. rado Stanley Fieldsas ir Ok-Kyu Song. Šis metodas aptinka b altymų ir b altymų sąveiką naudojant mielių Gal4 transkripcijos faktorių.
02 paveikslas: Yeast Two hibridas
Šiuo metodu, naudojant dominančius b altymus, pirmiausia sukuriami du suliejimai (hibridai): vienas b altymas sujungiamas su DNR surišimo domenu (DBD), o kitas b altymas sujungiamas su Gal4 transkripcijos faktoriaus aktyvatoriaus domenu (AD).. B altymai, sujungti su DBD, yra žinomi kaip masalas, o b altymai, sujungti su AD, yra žinomi kaip grobis. Mielių padermėje, kai masalas ir grobis sąveikauja, DBD ir AD yra arti, kad būtų sukurtas funkcinis Gal4 transkripcijos faktorius prieš reporterio geną. Funkcinis transkripcijos faktorius aktyvuoja reporterio geno ekspresiją. Be to, šiuo metu šis metodas naudojamas žinduolių ląstelėse integruotų membraninių b altymų sąveikai tikrinti.
Kokie yra „Yeast One Hybrid“ir „Yeast Two Hybrid“panašumai?
- Mielių vienas hibridas ir mielės dviejų hibridas yra du in vitro tyrimai, skirti analizuoti DNR ir b altymo bei b altymų ir b altymų sąveiką.
- Šiuose tyrimuose naudojamos mielių padermės.
- Abiejuose tyrimuose naudojamas Gal4 transkripcijos faktoriaus aktyvinimo domenas (AD).
- Jie naudoja reporterio geno (HIS3 arba LacZ) ekspresiją, kad nustatytų sąveiką.
- Jie turi masalą ir grobį.
- Abu tyrimai labai naudingi atliekant šiuolaikinius biologinius tyrimus.
Kuo skiriasi Yeast One Hybrid ir Yeast Two Hybrid?
Yeast one hibridas yra in vitro pagrįstas tyrimas, skirtas DNR ir b altymų sąveikai analizuoti, o mielių du hibridas yra in vitro pagrįstas b altymų ir b altymų sąveikos tyrimas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp mielių vieno hibrido ir mielių dviejų hibridų. Be to, viename mielių hibride masalas yra DNR fragmentas, o grobis yra b altymų molekulė. Kita vertus, mielių dviejuose hibriduose ir masalas, ir grobis yra b altymų molekulės.
Toliau pateiktoje infografikoje pateikiami skirtumai tarp mielių vieno hibrido ir mielių dviejų hibridų lentelės pavidalu, kad būtų galima palyginti.
Santrauka – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Mielių vieno hibrido ir mielių dviejų hibridų yra du svarbūs in vitro tyrimai. Mielių vienas hibridas yra in vitro pagrįstas tyrimas, skirtas DNR ir b altymų sąveikai analizuoti, o mielių du hibridas yra in vitro pagrįstas b altymų ir b altymų sąveikos tyrimas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp mielių vieno hibrido ir mielių dviejų hibridų.
