Pagrindinis skirtumas tarp kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo yra tas, kad kolorimetrinis tyrimas nustato spalvotų junginių koncentraciją tirpale, o fluorometrinis tyrimas – tirpalo kinetinį mechanizmą.
Biocheminis tyrimas yra metodas, kuriuo analitiškai aptinkamas arba kiekybiškai nustatomas biologinės molekulės arba medžiagos aktyvumas. Tai in vitro procesas. Kolorimetrinis tyrimas ir fluorometrinis tyrimas yra dviejų tipų įprasti biocheminiai tyrimai, atliekami laboratorijose. Keli metodai, tokie kaip ELISA ir Western blot, taip pat yra sudėtingi biocheminiai tyrimai, skirti kiekybiškai įvertinti metabolinį aktyvumą ir išmatuoti biomolekulių, tokių kaip b altymai, fermentai ir kitos mažos molekulės, funkcinį elgesį. Šio tipo tyrimai naudojami b altymo-DNR, b altymo-RNR ir b altymo-b altymų sąveikai nustatyti.
Kas yra kolorimetrinis tyrimas?
Kolimetrinis tyrimas yra metodas, kuriuo nustatoma spalvotų junginių koncentracija tirpale. Kitaip tariant, kolorimetrinis tyrimas yra reakcija, dėl kurios pasikeičia spalva dėl fermentinės arba cheminės reakcijos tarp reagentų ir analičių. Kolorimetriniai tyrimai atliekami biochemijoje, siekiant ištirti fermentus, specifinius junginius, hormonus, antikūnus ir kitas analites. Jie naudoja kolorimetrus arba spektrofotometrus. Kolorimetrai yra instrumentai, apibūdinantys spalvotus pavyzdžius, kad būtų galima objektyviai įvertinti spalvų charakteristikas. Spektrofotometras yra prietaisas, matuojantis šviesos intensyvumą kaip šviesos spalvos arba bangos ilgio funkciją.
01 pav.: Kolorimetrinis tyrimas
Kaip veikia kolorimetrinis tyrimas?
Atliekant kolorimetrinį tyrimą, paruošiama plokštelė su konkrečiu antikūnu, prijungtu prie šulinėlių. Tada pridedamas mėginys. Tai gali leisti mėginiui prisijungti prie antikūno. Tada į duobutes įdedamas aptikimo antikūnas ir substratas, kad reaguotų su aptikimo zondu. Stop tirpalas pridedamas pabaigoje prieš skaitymą. Tuščias šulinys, vadinamas tuščiuoju, paliekamas be mėginio. Kolorimetrinio tyrimo metu kuo tamsesnė spalva, tuo didesnė analitės koncentracija. Paprastai matavimui atlikti reikia tik vieno bangos ilgio. Bet jei yra pamatinis matavimas, naudojami du ar daugiau bangos ilgių.
Kas yra fluorometrinis tyrimas?
Fluorometrinis tyrimas yra metodas, kuriuo nustatomas fermentų reakcijų kinetinis mechanizmas. Fluorometrinis tyrimas atliekamas formuojant fluorescencinį produktą iš nefluorescuojančio substrato arba atvirkščiai. Šiame tyrime taip pat naudojamas fluorescencinio rezonanso energijos perdavimas (FRET), kur fermentinė reakcija pakeičia dviejų fluoroforų padėtį substrate, todėl pasikeičia fluorescencijos intensyvumas.
02 pav.: Fluorometrinis tyrimas
Fluorometriniai tyrimai paprastai yra daug jautresni nei kiti tyrimai. Diagnostinių fermentų įvertinimai pacientų audinių, ląstelių ar skysčių mėginiuose padidėja dėl didesnio jautrumo.
Kaip veikia fluorometrinis tyrimas?
Atliekant fluorometrinį tyrimą, substratas pridedamas prie mėginio plokštelėje, o fluorescencinis atsakas paimamas naudojant plokštelių skaitytuvą. Čia kiekviena ląstelė matuojama atskirai. Fluorometriniuose tyrimuose naudojamos nepermatomos plokštelės. Tai sumažina šviesos sklaidą. Šio tipo tyrimui reikalingi du bangos ilgiai. Vienas bangos ilgis skirtas sužadinimui aptikti, o kitas – spinduliavimui.
Kokie yra kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo panašumai?
- Kolorimetrinis tyrimas ir fluorometrinis tyrimas yra dviejų tipų biocheminiai tyrimai.
- Abu tyrimai atliekami medicininei diagnostikai.
- Šiuose tyrimuose vyksta fermentinė reakcija.
- Abu tyrimai apima substratą ir analites.
Kuo skiriasi kolorimetrinis ir fluorometrinis tyrimas?
Kolorimetrinis tyrimas yra metodas, kuriuo nustatoma spalvotų junginių koncentracija tirpale, o fluorometrinis tyrimas yra metodas, kuriuo nustatomas fermentų reakcijų kinetinis mechanizmas. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo. Be to, fluorometriniai tyrimai yra jautresni nei kolorimetriniai tyrimai; taigi, fluorometriniai tyrimai turi galimybę aptikti daugiau analičių. Taigi, tai dar vienas svarbus skirtumas tarp kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo. Be to, fluorometriniams tyrimams reikalingi du bangos ilgiai, o kolorimetriniai tyrimai atliekami su vienu bangos ilgiu.
Toliau pateiktoje infografijoje pateikiama daugiau kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo skirtumų.
Santrauka – kolorimetrinis ir fluorometrinis tyrimas
Biocheminis tyrimas yra analitinis procesas, naudojamas ląstelių metabolinėms reakcijoms nustatyti ir kiekybiškai įvertinti. Kolorimetrinis tyrimas ir fluorometrinis tyrimas yra dviejų tipų biocheminiai tyrimai. Kolorimetrinis tyrimas yra reakcija, dėl kurios pasikeičia spalva dėl fermentinės ar cheminės reakcijos tarp reagentų ir analičių, o fluorometrinis tyrimas yra metodas, naudojamas fermentų reakcijų kinetiniam mechanizmui nustatyti. Abu tyrimai priklauso nuo fermentinės reakcijos, kurioje dalyvauja substratas ir analitė. Fluorometriniai tyrimai yra jautresni nei kolorimetriniai. Svarbiausia, kad fluorometriniams tyrimams reikia dviejų bangos ilgių, o kolorimetrinius tyrimus galima atlikti tik su vienu bangos ilgiu. Taigi čia apibendrinamas skirtumas tarp kolorimetrinio ir fluorometrinio tyrimo.
