Pagrindinis skirtumas tarp BCA ir Bradfordo tyrimo yra tas, kad BCA tyrimas užima daug laiko ir nėra toks tikslus, o Bradfordo tyrimas yra greitas ir tikslus.
BCA ir Bradfordo tyrimas yra du b altymų koncentracijos nustatymo metodai. Šie du tyrimai turi skirtingus tyrimo principus ir jų tikslumą.
Kas yra BCA tyrimas?
BCA tyrimas arba bicinchonino rūgšties tyrimas yra biocheminis tyrimas, naudingas nustatant bendrą b altymų koncentraciją tirpale. Šis metodas taip pat vadinamas Smitho tyrimu jo išradėjo Paulo K. Smitho vardu. Šis analizės metodas rodo panašumus su Lowry b altymų tyrimu, Bradfordo b altymų tyrimu arba biureto reagentu. Bendrą b altymų koncentraciją tam tikrame mėginyje galime stebėti keisdami mėginio tirpalo spalvą, kuri iš žalios tampa purpurine. Šis spalvos pasikeitimas vyksta proporcingai b altymų kiekiui. Po to galime naudoti kolorimetrinę techniką, kad išanalizuoti spalvos intensyvumą ir b altymų kiekį mėginyje.
BCA b altymų kiekio nustatymo metodas
Atsižvelgiant į BCA tyrimo mechanizmą, tipiškame BCA tirpale yra labai šarminis tirpalas, kurio pH yra beveik apie 11,25, o šio tirpalo sudedamosios dalys yra bicinchonino rūgštis, natrio karbonatas, natrio bikarbonatas, natrio tartratas ir vario(II) sulfato pentahidratas. Šis tyrimas visų pirma priklauso nuo dviejų cheminių reakcijų: vario (II) redukavimo į varį (I) peptidiniais ryšiais b altymuose ir dviejų bicinchonino rūgšties molekulių chelatacijos su vario (I) jonu, todėl susidaro purpurinės spalvos kompleksas, kuris gali sugeria šviesą esant 562 nm bangos ilgiui. Pirmoje reakcijoje vario (II) kiekis, sumažintas peptidinėmis jungtimis, yra proporcingas b altymo kiekiui mėginyje.
Kas yra Bradfordo tyrimas?
Bradfordo tyrimas yra spektroskopinis analizės metodas, naudingas matuojant b altymų koncentraciją tirpale. Šį metodą 1976 m. sukūrė Marion M. Bradford ir tai yra palyginti greitas ir tikslus metodas.
B altymų ir Bradfordo reagento spalvinė reakcija
Šiuo metodu galime nustatyti b altymų kiekio koncentraciją mėginyje. Cheminė reakcija, kuri vyksta mėginyje šio tyrimo metu, priklauso tik nuo b altymo aminorūgščių sudėties mėginyje.
Bradfordo b altymų kiekio nustatymo metodas
Svarstant šio tyrimo metodą, tai yra kolorimetrinis b altymų tyrimas, pagrįstas dažo, pavadinto Coomassie Brilliant Blue G-250, absorbcijos poslinkiu. Paprastai šis dažiklis yra trijų formų: anijoninė (mėlyna), neutrali (žalia) ir katijoninė (raudona). Todėl rūgštinėmis sąlygomis dažai keičia spalvą iš raudonos į mėlyną. Taip yra dėl to, kad b altymas jungiasi su dažais. Priešingai, jei nėra b altymų, kurie galėtų susieti su dažais, spalva nepasikeičia, tirpalas įgauna raudonai rudą spalvą. Šis dažiklis gali sudaryti stiprų nekovalentinį kompleksą su b altymo karboksilo grupe dėl Van der Waal jėgų ir elektrostatinių traukų.
Kuo skiriasi BCA ir Bradfordo tyrimas?
BCA ir Bradfordo tyrimas yra du b altymų koncentracijos nustatymo metodai. Šie du tyrimai turi skirtingus tyrimo principus ir jų tikslumo skirtumus. Pagrindinis skirtumas tarp BCA ir Bradfordo tyrimo yra tas, kad BCA tyrimas užima daug laiko ir yra mažiau tikslus, tuo tarpu Bradfordo tyrimas yra greitas ir tikslus.
Toliau pateiktoje infografijoje lentelės pavidalu apibendrinami skirtumai tarp BCA ir Bradfordo tyrimo.
Santrauka – BCA vs Bradford Assay
BCA tyrimas arba bicinchonino rūgšties tyrimas yra biocheminis tyrimas, naudingas nustatant bendrą b altymų koncentraciją tirpale. Bradfordo tyrimas yra spektroskopinis analizės metodas, naudingas matuojant b altymų koncentraciją tirpale. Pagrindinis skirtumas tarp BCA ir Bradfordo tyrimo yra tas, kad BCA atima daug laiko ir nėra toks tikslus, o Bradfordo tyrimas yra greitas ir tikslus.
