Pagrindinis skirtumas tarp chromatofokusavimo ir izoelektrinio fokusavimo yra tas, kad chromatofokusavimas yra kolonėlės chromatografijos metodas, kuriame naudojamos jonų mainų dervos, o izoelektrinis fokusavimas yra elektroforezės technikos rūšis, kuriai naudojami imobilizuoti pH gradiento geliai.
Chromatofokusavimas ir izoelektrinis fokusavimas yra du būdai, kuriais b altymai atskiriami pagal jų izoelektrinius taškus. Tiek chromatofokusavimas, tiek izoelektrinis fokusavimas turi didelę skiriamąją gebą. Chromatofokusavimas yra didelės skiriamosios gebos kolonėlės chromatografijos metodas, o izoelektrinis fokusavimas yra elektroforetinio atskyrimo metodas. Be to, chromatofokusuojant nenaudojamas elektrinis laukas, o izoelektriniam fokusavimui reikalingas elektrinis laukas.
Kas yra chromatinis fokusavimas?
Chromatofocusing yra didelio eliuavimo chromatografijos tipas, kuris atskiria b altymus pagal jų izoelektrinio taško skirtumus. Jame naudojama jonų mainų dervos kolonėlė ir viduje sukurtas pH gradientas. Skirtingai nuo izoelektrinio fokusavimo, chromatofokusavimas neapima elektrinio lauko. Chromatofokusavimas yra galingas gryninimo būdas, galintis išskirti labai panašias molekules, net skiriasi tik 0,02 pH vienetais. Todėl chromatofokusavimas geriausiai tinka kaip paskutinis poliravimo etapas, kai reikia didelės skiriamosios gebos atskiriant labai panašius komponentus.
Atliekant chromatofokusavimą, mėginys uždedamas ant kolonėlės sumaišant jį su pradžios buferiu. B altymai, kurių pH yra didesnis nei jų izoelektrinis taškas, yra neigiamai įkrauti ir lieka šalia kolonėlės viršaus, o kiti b altymai, kurių pH yra žemiau jų izoelektrinio taško, migruoja kolonėlėje. Aukščiausią izoelektrinį tašką turintis b altymas eliuuojamas pirmiausia, o žemiausią izoelektrinį tašką turintis b altymas – paskutinis. Šiam metodui įtakos turi keli veiksniai, pvz., b altymų nusodinimas ir pH gradiento tiesiškumas.
Kas yra izoelektrinis fokusavimas?
Izoelektrinis fokusavimas – tai būdas atskirti skirtingas molekules pagal jų izoelektrinį tašką. Jis taip pat žinomas kaip elektrofokusavimas. Šis metodas dažnai naudojamas b altymų atskyrimui gelyje. Atliekant izoelektrinį fokusavimą, mėginys dedamas į imobilizuotą pH gradiento (IPG) gelį. IPG gelis yra akrilamido gelio matrica, kopolimerizuota su pH gradientu. B altymai migruoja link katodo, kol suranda savo izoelektrinių taškų pH sritį. Kai b altymas pasiekia pH, kuriame nėra grynojo krūvio, migracija nutrūksta ir atsiranda stacionari juosta. Taip pat kiekvienas b altymas sukuria juostą pH gradiento taške, atitinkančiame jo izoelektrinį tašką.
01 pav.: Izoelektrinis fokusavimas
Izoelektrinis fokusavimas yra pirmasis dvimatės gelio elektroforezės žingsnis. Taikant šį metodą, b altymai pirmiausia atskiriami pagal jų izoelektrinius taškus izoelektriniu fokusavimu, o po to atskiriami pagal jų molekulinę masę naudojant SDS-PAGE.
Kokie yra chromatofokusavimo ir izoelektrinio fokusavimo panašumai?
- Chromatofokusavimas ir izoelektrinis fokusavimas yra du labai ryškūs metodai.
- Abu yra pagrįsti b altymų izoelektriniu tašku.
- Šiuose metoduose naudojamas pH gradientas.
- Abi procedūros yra informatyvios žmogaus hemoglobino variantams apibūdinti.
- Jie gali išskirti molekules, kuriose pI reikšmės skiriasi vos 0,02 pH vieneto.
Kuo skiriasi chromatofokusavimas ir izoelektrinis fokusavimas?
Chromatofocusing yra didelės skiriamosios gebos kolonėlės chromatografijos metodas, kuris atskiria b altymus pagal jų izoelektrinį tašką. Priešingai, izoelektrinis fokusavimas yra elektroforezės metodas, kuris atskiria b altymus pagal jų izoelektrinį tašką, taikant elektrinį lauką išilgai kapiliare susidariusio pH gradiento. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp chromatofokusavimo ir izoelektrinio fokusavimo.
Kitas skirtumas tarp chromatofokusavimo ir izoelektrinio fokusavimo yra tas, kad chromatofokusavimas neapima elektrinio lauko, o izoelektriniam fokusavimui reikalingas elektrinis laukas.
Santrauka – chromatinis fokusavimas prieš izoelektrinį fokusavimą
Chromatofokusavimas ir izoelektrinis fokusavimas yra du panašūs metodai, pasižymintys dideliu molekulių, ypač labai panašių molekulių, skiriamuoju gebėjimu. Chromatofokusavimas yra didelės skiriamosios gebos kolonėlės chromatografijos metodas, o izoelektrinis fokusavimas yra elektroforezės metodas. Priešingai nei izoelektrinis fokusavimas, chromatofokusavimas neapima elektrinio lauko. Taigi čia apibendrinamas skirtumas tarp chromatofokusavimo ir izoelektrinio fokusavimo.
