Pagrindinis skirtumas tarp imunoprecipitacijos ir koimunoprecipitacijos yra tas, kad imunoprecipitacija yra metodas, kai b altymas nusodinamas iš tirpalo naudojant specifinį antikūną, o koimunoprecipitacija yra metodas, kuriuo iš tirpalo, naudojant specifinį antikūną, nusodinami nepažeisti b altymų kompleksai.
Antigeno ir antikūno sąveika yra specifinė cheminė sąveika tarp B ląstelių gaminamų antikūnų ir antigenų (b altymų) imuninės reakcijos metu. Paprastai tirpūs antigenai susijungia su tirpiais antikūnais esant elektrolitui esant tirpiam temperatūrai ir pH, kad susidarytų netirpus matomas kompleksas. Tai vadinama kritulių reakcija. Todėl imunoprecipitacija ir koimunoprecipitacija yra dviejų tipų nusodinimo reakcijos, kurios įprastai naudojamos laboratorijose, siekiant nustatyti b altymus, tokius kaip antigenai.
Kas yra imunoprecipitacija?
Imunoprecipitacija yra b altymo nusodinimo iš tirpalo metodas, naudojant specifinį antikūną. Kartais šis metodas taip pat žinomas kaip individualus b altymų imunoprecipitacija. Imunoprecipitacija naudoja antikūną, kad atskirtų pasirinktą dominantį b altymą iš ląstelių lizato. Antikūnas iš mišinio išvalo specifinį tikslinį b altymą arba antigeną. Antikūnas prisijungia prie b altymo, o antikūno ir antigeno kompleksas ištraukiamas iš mėginio. Eksperimentinėje sąrangoje antigeno ir antikūnų kompleksas ištraukiamas naudojant A/G sujungtą agarozę arba magnetines granules. Vėliau karoliukai nuplaunami, o dominantis b altymas išplaunamas. Išgrynintas b altymas arba antigenas, gautas imunoprecipitacijos būdu, tikrinami įvairiais metodais, tokiais kaip su fermentu susietas imunosorbentas tyrimas (ELISA) ir Western blot (WB).
01 pav.: Imunopretipitacija
Be to, izoliuotus b altymus arba antigenus galima kiekybiškai įvertinti ir identifikuoti naudojant masės spektrometriją, naudojant fermentinius skaidymo būdus, pagrįstus pirmine seka. Prieš pradedant imunoprecipitacijos eksperimentą, reikia atsižvelgti į tam tikras aplinkybes: metodo formato pasirinkimas, b altymų ir granulių surišimas, tinkamo pirminio antikūno ir izotipo parinkimas bei neigiama kontrolė.
Kas yra koimunokritimas?
Koimunoprecipitacija yra nepažeistų b altymų kompleksų nusodinimo iš tirpalo metodas, naudojant specifinį antikūną. Bendra imunoprecipitacija paprastai veikia parenkant specifinį antikūną, nukreiptą į žinomą b altymą (antigeną), kuris, kaip manoma, yra didesnio b altymų komplekso narys. Nutaikius žinomą narį specifiniu antikūnu, iš tirpalo galima ištraukti visą b altymų kompleksą. Tai leidžia identifikuoti nežinomus komplekso narius. B altymų kompleksų ištraukimo iš tirpalo koncepcija kartais vadinama „nutraukimo“mechanizmu.
02 pav. B Bendras imunokritimas
Koimunoprecipitacija yra galingas metodas, naudojamas b altymų ir b altymų sąveikai analizuoti. Pagrindinis koimunoprecipitacijos tikslas yra identifikuoti sąveikaujančius partnerius, tokius kaip ligandai, kofaktoriai arba signalinės molekulės dominančiam b altymui. Be to, koimunoprecipitacija yra veiksmingas metodas, naudojamas b altymams atskirti nuo serumo, ląstelių lizato, homogenizuoto audinio ar kondicionuotos terpės.
Kokie yra imunoprecipitacijos ir bendro imunoprecipitacijos panašumai?
- Imunoprecipitacija ir koimunoprecipitacija yra dviejų tipų nusodinimo reakcija pagrįsti metodai.
- Abu metodai gali būti naudojami tikslinio antigeno identifikavimui naudojant specifinį antikūną.
- Abu metodai labai priklauso nuo antigeno ir antikūnų sąveikos.
- Jie reguliariai naudojami klinikinėse laboratorijose.
Kuo skiriasi imunoprecipitacija ir koimunoprecipitacija?
Imunoprecipitacija yra metodas, kai b altymas nusodinamas iš tirpalo naudojant specifinį antikūną, o koimunoprecipitacija yra metodas, kuriuo iš tirpalo nusodinami nepažeisti b altymų kompleksai, naudojant specifinį antikūną. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp imunoprecipitacijos ir koimunoprecipitacijos. Be to, imunoprecipitacija dažniau naudojama laboratorijose, o koimunoprecipitacija laboratorijose nenaudojama.
Toliau pateiktoje infografikoje pateikiami skirtumai tarp imunoprecipitacijos ir bendro imunoprecipitacijos lentelės pavidalu, kad būtų galima palyginti.
Santrauka – imunoprecipitacija prieš koimunokritimą
Imunoprecipitacija ir koimunoprecipitacija yra dviejų tipų nusodinimo reakcija pagrįsti metodai, kurie priklauso nuo antigeno ir antikūnų sąveikos. Taikant imunoprecipitacijos metodą b altymas nusodinamas iš tirpalo naudojant specifinį antikūną, o taikant koimunoprecipitacijos metodą, naudojant specifinį antikūną, iš tirpalo nusodinami nepažeisti b altymų kompleksai. Taigi, čia apibendrinamas skirtumas tarp imunoprecipitacijos ir bendro imunoprecipitacijos.
