Pagrindinis skirtumas – YAC ir M13 fagų vektorius
DNR klonavimas yra svarbus procesas, leidžiantis dauginti svarbius organizmų DNR fragmentus. Tam reikia sujungti specifinę DNR su vektorine DNR, kad būtų sukurta rekombinantinė DNR, kuri transformuojasi į šeimininką. Vektorius yra DNR molekulė, kuri veikia kaip priemonė, pernešanti svetimą genetinę medžiagą į kitą ląstelę ar organizmą. Jis turėtų būti pajėgus daugintis šeimininko organizme ir gaminti kelias rekombinantinės DNR kopijas. DNR klonavimui naudojami įvairūs vektoriai. Mielių dirbtinė chromosoma (YAC) ir M13 fago vektorius yra dviejų tipų. Pagrindinis skirtumas tarp YAC ir M13 fago vektoriaus yra tas, kad YAC yra dirbtinė chromosoma, kuri dauginasi mielių ląstelėse, o M13 fago vektorius yra vienos grandinės žiedinė bakteriofago M13 DNR, kuri replikuojasi E Coli ląstelėse.
Kas yra YAC vektorius?
YAC yra dirbtinai sukurta chromosoma, kuri gali pernešti didelį svetimos DNR segmentą ir daugintis mielių ląstelėse. Jis turi centromerą, telomerą ir autonomiškai replikuojančias sekas, būtinas replikacijai ir stabilumui. YAC taip pat turėtų turėti selektyvų žymeklį arba žymenis ir restrikcijos vietas, kad jis būtų veiksmingas klonavimo vektorius. Didelės sekos nuo 1000 kb iki 2000 kb gali būti įterptos į YAC ir perkeltos į mieles.
01 pav.: YAC Vector
Kas yra M13 fago vektorius?
Bacteriophage M13 yra virusas, kuris užkrečia ir dauginasi E Coli. M13 bakteriofago genomas yra mažo dydžio, apie 6,7 kb. Tai viengrandė, žiedinė ir teigiamų pojūčių DNR. Šis virusas specialiai užkrečia E Coli bakterijas per F pilus. Kai ji patenka į ssDNR į bakteriją, ji sintezuoja savo komplementarią grandinę ir tampa dsDNR arba M13 replikacine forma (RF). RF gali elgtis kaip plazmidė šeimininko organizme. DsDNR replikuojasi E Coli ir gamina ssDNR, turinčią naujus fagus. Šie nauji fagai nuolat išleidžiami iš E Coli nežudant ląstelės-šeimininkės. Tačiau infekcija lėtina E coli augimą. dsDNR gali būti išgaunama iš bakterijų ląstelių ir naudojama kaip DNR klonavimo vektoriai. Jie žinomi kaip M13 fagų vektoriai. Jais galima lengvai manipuliuoti ir naudoti panašiai kaip plazmidinius vektorius.
Šių M13 fagų gebėjimas užkrėsti puikiai tinka naudoti kaip vektorių klonuojant genus. Kuriant M13 į vektorių, į jo genomą turėtų būti įtraukti keli elementai. Jie yra lac represoriaus (lac I) b altymo genas, operatoriaus proksimalinė lac Z geno sritis, lac promotorius ir daugybinė klonavimo vieta (polilinkeris). Kai M13 dsDNR naudojama kaip vektoriai, ji gali būti traktuojama kaip plazmidinis vektorius. Tačiau ssDNR M13 naudojimas turi pranašumų nustatant DNR seką ir į vietą nukreiptą mutagenezę.
Kadangi M13 fago vektorius turi daugybinę klonavimo vietą lacZ regione, rekombinuotus vektorius galima lengvai atpažinti atliekant mėlynos/b altos kolonijos atranką agaro plokštelėse, kuriose yra IPTG ir X-Gal. Ant plokštelių susidariusiose mėlynose plokštelėse nėra rekombinuotų fagų. Todėl klonavimo tikslu galima pasirinkti fagus su intarpais.
02 pav.: Bakteriofagas M13
Kuo skiriasi YAC ir M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC yra genetiškai modifikuota chromosoma, kuri turi galimybę pernešti didelį svetimos DNR segmentą ir daugintis mielių ląstelėse. | M13 fago vektorius yra virusinis vektorius, sukurtas bakteriofago M13, kuris naudojamas svetimai DNR įterpti į E Coli. |
| Paskirtis | |
| YAC buvo sukurti dideliems genominės DNR fragmentams klonuoti į mieles. | M13 fago vektoriai naudojami svetimai DNR įterpti į E Coli. |
| Įterpti ilgį | |
| YAC gali turėti megabazės dydžio genominių intarpų (1000 kb – 2000 kb). | Intarpų dydis yra apie 1 500 b/s. |
| Statyba | |
| YAC DNR sunku išvalyti nepažeistą, todėl YAC vektorių sistemai sukurti reikalinga didelė koncentracija. | Tai vyksta per ciklinę fotosintezės elektronų grandinę. |
| Stabilumas | |
| YAC nestabilus. | M13 fagus galima lengvai išgauti. |
| Dydis | |
| Fermentai yra didesnės molekulės. | M13 fagai yra stabilūs nei YAC. |
Santrauka – YAC vs M13 Phage Vector
YAC yra dirbtinai sukurta vektorių sistema, naudojanti specifinį mielių chromosomos regioną, kad į mielių ląsteles būtų įterpti dideli genetinės medžiagos segmentai. M13 fago vektorius yra vektorių sistema, gauta iš bakteriofago M 13, kuri naudoja E coli kaip organizmą šeimininką. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp YAC ir M13 Phage Vector. Abi yra vienodai naudingos rekombinantinės DNR technologijose ir genų klonavimui.
