Pagrindinis skirtumas – YAC ir BAC vektoriai
Vektoriai naudojami molekuliniam klonavimui. Vektorius gali būti apibrėžiamas kaip DNR molekulė, kuri veikia kaip priemonė, pernešanti svetimą genetinę medžiagą į kitą ląstelę. Vektorius, kuriame yra svetimos DNR, yra žinomas kaip rekombinantinė DNR ir turi turėti galimybę ją replikuoti ir ekspresuoti šeimininko organizme. Mielių dirbtinė chromosoma (YAC) ir bakterinė dirbtinė chromosoma (BAC) yra dviejų tipų vektoriai, dalyvaujantys klonuojant. Pagrindinis skirtumas tarp YAC ir BAC yra tas, kad YAC yra dirbtinai sukurta vektorių sistema, naudojanti tam tikrą mielių chromosomos regioną, kad į mielių ląsteles būtų įterpti dideli genetinės medžiagos segmentai, o BAC yra dirbtinai sukurta vektorių sistema, naudojanti tam tikrą E regioną.coli chromosomą, kad į E. coli ląsteles įterptų didelius DNR segmentus.
Kas yra YAC vektoriai?
YAC (Mielių dirbtinė chromosoma) yra dirbtinai sukurta chromosoma, kuri gali pernešti didelį svetimos DNR segmentą ir daugintis mielių ląstelėse. Jis turi centromerą, telomerus ir autonomiškai replikuojančias sekas, kurios yra būtinos replikacijai ir stabilumui. YAC taip pat turėtų turėti selektyvų žymeklį arba žymenis ir restrikcijos vietas, kad jis būtų veiksmingas klonavimo vektorius. Didelė seka nuo 1000 kb iki 2000 kb gali būti įterpta į YAC ir perkelta į mieles. YAC transformacijos efektyvumas yra labai mažas.
01 pav.: YAC Vector
Kas yra BAC vektoriai?
Bakterinė dirbtinė chromosoma (BAC) yra dirbtinai sukurta chromosoma, skirta molekuliniam klonavimui. Jis turi specifinius E. coli F plazmidės regionus ir yra apskritas ir labai susuktas. BAC sukurtas klonuoti DNR fragmentus į bakterijas, ypač į E. coli. Jis gali turėti iki 300 kb dydžio DNR fragmentus. Palyginti su YAC, BAC klonavimo intarpai yra mažesnio dydžio. BAC buvo sukurti 1992 m. ir vis dar yra populiarūs dėl savo stabilumo ir lengvos konstrukcijos. BAC taip pat naudingi kuriant vakcinas.
02 pav. BAC vektorius molekuliniame klonavime
Kuo skiriasi YAC ir BAC vektoriai?
YAC prieš BAC vektorius |
|
| YAC yra genetiškai modifikuota chromosoma, kurios klonavimui naudojama mielių DNR. | BAC yra genetiškai modifikuota DNR molekulė, naudojanti E. coli DNR klonavimui. |
| Lytis | |
| YAC buvo sukurti dideliems genominės DNR fragmentams klonuoti į mieles. | BAC buvo sukurti dideliems genomo fragmentams klonuoti į Escherichia coli. |
| Įterpti ilgį | |
| YAC gali turėti megabazių dydžio genominių intarpų. (1000 kb – 2000 kb). | BAC gali turėti 200–300 kb ar mažesnių intarpų. |
| Statyba | |
| YAC DNR sunku išvalyti nepažeistą, todėl norint sukurti YAC vektorių sistemą, reikia didelės koncentracijos. | BAC lengva išvalyti nepažeistą ir jį galima lengvai sukonstruoti. |
| Chimerizmas | |
| YAC dažnai būna chimeriniai. | BAC retai būna chimeriniai. |
| Stabilumas | |
| YAC nestabilus. | BAC yra stabilus. |
| Modifikacijos | |
| Mielių rekombinacija yra labai įmanoma ir visada išlieka aktyvi. Taigi jis gali generuoti trynimus ir kitus pertvarkymus YAC. | E. coli rekombinacijai užkertamas kelias ir prireikus įjungiamas. Taigi sumažėja nepageidaujamų BAC pertvarkymų. |
| Priežiūra | |
| Manipuliuojant rekombinantiniais YAC, paprastai YAC reikia perkelti į E. coli, kad būtų galima vėliau manipuliuoti. Vadinasi, tai sunkus procesas. | BAC modifikacija vyksta tiesiogiai E. coli. Taigi DNR perdavimo nereikia. Taigi procesas nėra daug pastangų reikalaujantis. |
Santrauka – YAC vs BAC vektoriai
YAC tapo esminiu klonavimo procesų tyrimo įrankiu dėl savo gebėjimo klonuoti didelius DNR fragmentus į šeimininko organizmą. Tačiau YAC turi keletą trūkumų kaip vektoriai, pavyzdžiui, statybos sunkumai, chimerizmas, nestabilumas ir tt Todėl, norėdami įveikti šias problemas, mokslininkai sukūrė BAC vektorius. BAC buvo sukurtas naudojant specifinius E. coli chromosomos regionus. Tai stabilus vektorius ir jį galima lengvai sukonstruoti. Tačiau DNR, kurią gali apdoroti BAC, ilgis yra iki 20 kartų mažesnis nei YAC. Tai yra skirtumas tarp YAC ir BAC vektorinių sistemų. Šiais laikais laboratorijose pirmenybė teikiama BAC, o ne YAC.
