Pagrindinis skirtumas – SDS puslapis ir Western Blot
Western blotting yra metodas, kuris aptinka konkretų b altymą iš b altymų mėginio. Ši technika atliekama keliais pagrindiniais etapais: gelio elektroforeze, blotingu ir hibridizacija. Natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė (SDS puslapis) yra tam tikra gelio elektroforezės technika, naudojama b altymams atskirti pagal jų dydį (molekulinę masę). Western blot yra specialus blotavimo membranos lapas, naudojamas tam pačiam b altymų modeliui perkelti į SDS puslapį. Pagrindinis skirtumas tarp SDS puslapio ir Western blot yra tas, kad SDS puslapis leidžia atskirti b altymus mišinyje, o Western blot leidžia aptikti ir kiekybiškai įvertinti konkretų b altymą iš mišinio. Abu yra naudingi b altymų analizės tyrimuose.
Kas yra SDS puslapis?
SDS puslapis yra gelio elektroforezės metodas, naudojamas b altymams atskirti. Jis dažniausiai naudojamas biochemijoje, genetikoje, kriminalistikoje ir molekulinėje biologijoje. Kai b altymai ekstrahuojami iš mėginio, jie paleidžiami ant gelio, sudaryto iš SDS ir poliakrilamido. SDS yra anijoninis ploviklis, naudojamas b altymams linijuoti (denatūruoti b altymus) ir suteikti neigiamą krūvį tiesiniams b altymams proporcingai jų molekulinei masei. Poliakrilamidas tampa tvirta gelio atrama. Denatūruoti b altymai, kurie yra neigiamai įkrauti, per gelį migruoja link teigiamo aparato galo. Priklausomai nuo b altymų dydžių, skiriasi b altymų migracijos greitis ir vyksta atskyrimas. Todėl SDS puslapis yra naudingas atskiriant atskirus b altymus pagal jų dydį.
Poliakrilamido gelio, skirto b altymams frakcionuoti, paruošimas yra esminis SDS puslapio žingsnis. Tinkama poliakrilamido koncentracija ir naudojamo kryžminio ryšio agento tipas stipriai veikia fizines gelio savybes, todėl iš tikrųjų atskiriami skirtingi b altymai. Gelio porų dydis turi būti tinkamai valdomas, kad būtų galima veiksmingai atskirti. Tačiau SDS puslapis laikomas didelės raiškos b altymų atskyrimo metodu.
SDS Puslapio metodas turi didelį b altymų analizės apribojimą. Kadangi SDS denatūruoja b altymus prieš atskyrimą, jis neleidžia nustatyti fermentinio aktyvumo, b altymų surišimo sąveikos, b altymų kofaktorių ir kt.
01 pav.: SDS puslapis
Kas yra Western Blot?
Western blotting metodas leidžia aptikti konkretų b altymą iš b altymų mišinio ir išmatuoti b altymo kiekį bei molekulinę masę. Western blot yra membrana, naudojama blotavimo procedūros metu, siekiant gauti veidrodinį b altymų modelių SDS-poliakrilamido gelyje vaizdą. Membrana, naudojama Western blot'ui, daugiausia sudaryta iš nitroceliuliozės arba polivinilideno difluorido (PVDF). Membrana su perkeltu b altymu gali būti naudojama norimam b altymui identifikuoti. Tam reikia aukštos kokybės antikūnų norimam b altymui aptikti hibridizacijos būdu. Antikūnas prisijungia prie savo specifinio antigeno ir atskleidžia norimo antigeno, kuris yra b altymas, buvimą.
B altymų perkėlimas iš SDS poliakrilamido gelio į Western blot atliekamas elektroblotavimo būdu. Tai efektyvus ir greitas metodas, dėl kurio b altymai elektroforezuojasi iš gelio ir patenka ant nitroceliuliozės membranos (Western blot).
02 pav.: Western Blot
Kuo skiriasi SDS puslapis ir Western Blot?
SDS puslapis prieš Western Blot |
|
| SDS Page yra gelio elektroforezės metodas. | Western blot yra metodas, kuris atliekamas membranoje, siekiant aptikti konkretų b altymą iš mišinio. |
| Naudoti | |
| SDS puslapyje galima atskirti b altymus pagal jų dydį. | Western blot leidžia perkelti b altymus į SDS puslapio gelį nekeičiant jo modelio ir leidžia hibridizuotis su specifiniais antikūnais. |
| Trūkumai | |
| B altymų denatūracija, didelė kaina ir neurotoksinų buvimas yra šio metodo trūkumai. | Šis metodas užima daug laiko ir reikalauja geros patirties ir konkrečių kontroliuojamų sąlygų. |
Santrauka – SDS puslapis prieš Western Blot
SDS puslapis ir Western blot yra du b altymų analizės metodai. SDS puslapis leidžia lengvai atskirti b altymus ant gelio pagal jų molekulinę masę. Western blot padeda patvirtinti konkretaus b altymo buvimą ir kiekį hibridizuojant su specifiniais antikūnais. Tai yra skirtumas tarp SDS puslapio ir Western blot.
