Pagrindinis skirtumas tarp crRNR tracrRNR ir gRNR yra tas, kad crRNR yra vienas iš dviejų CRISPR RNR tipų, kurie papildo tikslinę DNR seką, o tracrRNA yra antrasis CRISPR RNR tipas, kuris veikia kaip Cas nukleazę ir gRNR surišantis karkasas yra vienas iš dviejų pagrindinių CRISPR-Cas9 bakterijų ir archėjų sistemos komponentų, kurie atpažįsta tikslinę DNR ir nukreipia Cas b altymus, kad taikinėje DNR pertrauktų dvigubas grandines.
CRISPR reiškia sugrupuotus reguliarius trumpus palindrominius pasikartojimus. Tai viena iš imuninių sistemų bakterijose ir archėjose. Bakterijos ir archėjos naudoja šią sistemą, kad apsisaugotų nuo virusinių patogenų. Tai vienas nuostabiausių mechanizmų, apimantis sėkmingą genetinę modifikaciją. Šis mechanizmas (CRISPR-Cas9) naudojamas kaip naujas genų redagavimo įrankis biotechnologijoje. Ji atnešė naujų biotechnologijų pažangos, ypač genų inžinerijos srityje.
Yra du pagrindiniai CRISPR-Cas9 sistemos komponentai. Jie yra orientacinės RNR (gRNR) ir su CRISPR susijusios (Cas) nukleazės. Vadovo RNR yra specifinė RNR seka, kuri nukreipia Cas b altymus skaidyti tikslinę DNR. Vadovo RNR susideda iš dviejų tipų RNR. Jie yra crispr RNR (crRNR) ir tracrRNR. Su CRISPR susijusios (Cas) nukleazės yra nespecifinės endonukleazės, kurios padaro dvigubos grandinės pertraukas tikslinėje DNR. Dvigubos grandinės pertraukos tikslinėje DNR bakterijos ir archėjos nukreipia savo endogeninius atkūrimo mechanizmus, kad inaktyvuotų viruso DNR.
Kas yra crRNA?
crRNA arba Crispr RNR yra vienas iš dviejų vadovaujančiosios RNR tipų. Struktūriškai tai yra 17-20 nukleotidų seka. Vertingiausia crRNR savybė yra ta, kad ji papildo tikslinę DNR. Todėl crRNR sutampa su viruso DNR seka. CRISPR-Cas 9 sistemos specifiškumas priklauso nuo crRNR. Bakterijose crRNR egzistuoja susiliejusi su tracrRNR seka, kuri yra antrasis CRISPR RNR tipas. crRNR gamybą sukelia pakartotinis bakterijų poveikis virusui. Ekspozicijos metu vyksta crRNR koduojančio geno transkripcija. Tada įsijungia gynybos mechanizmas nuo viruso.
01 pav.: CRISPR-Cas9 sistema
Kas yra tracrRNA?
Trans-aktyvuojanti crRNR arba tracrRNR yra antroji guideRNR arba CRISPR RNR dalis. Jis tariamas kaip atsekamoji RNR. tracrRNR yra endonukleazės Cas 9 b altymo surišimo karkasas. Kitaip tariant, tracrRNA veikia kaip rankena, nukreipianti Cas9 link tikslinės DNR. Struktūriškai tracrRNR turi 42 nukleotidus. Jis egzistuoja kartu su crRNR.
Kas yra gRNR?
Vadovinė RNR arba gRNR yra vienas iš dviejų pagrindinių CRISPR-Cas9 imuninės sistemos komponentų. Tai specifinė RNR seka, sudaryta iš dviejų elementų: crRNR ir tracrRNR. gRNR atpažįsta tikslinę DNR ir nukreipia Cas b altymus padaryti dvigubos grandinės pertraukas tikslinėje DNR. Kad tai padarytų, crRNR susideda iš papildomos tikslinės DNR sekos, o tracrRNR nukreipia Cas b altymus, veikiančius kaip rankena.
02 pav.: gRNA
Tinkamos gRNR sukūrimas yra svarbus CRISPR-Cas9 genų redagavimo įrankio žingsnis. Todėl CRISPR sistemos sėkmė ir redagavimo efektyvumas priklauso nuo teisingos gRNR sekos. gRNR gali būti ekspresuojama ląstelėse iš transfekuotos plazmidės. Kai klonuotos plazmidės įvedamos į ląsteles, ląstelės šeimininkės generuoja gRNR. Dažniausiai generuojama gRNR susideda iš 100 bazinių porų.
Kokie yra crRNA tracrRNR ir gRNR panašumai?
- crRNR, tracrRNR ir gRNR yra RNR sekos, randamos bakterijose ir archėjose.
- Jie visi priklauso CRISPR sistemai.
- gRNR yra pagaminta iš crRNR ir tracrRNR.
- Jie dalyvauja atpažįstant bakteriofago DNR ir nukreipiant endonukleazes į tikslinę DNR.
- Todėl visi trys RNR tipai yra susiję su Cas9 nukleazės nukreipimu, kad įsiveržusiose svetimose genetinėse medžiagose būtų sudarytos dvigubos grandinės pertraukos.
- CRISPR eksperimento sėkmė priklauso nuo visų trijų RNR tipų.
Kuo skiriasi crRNR tracrRNR ir gRNR?
crRNR yra CRISPR gRNR dalis, kuri yra papildoma tikslinei DNR, o tracrRNR yra antroji gRNR dalis, kuri yra Cas nukleazės surišimo karkasas.gRNR yra crRNR ir tracrRNR derinys, ir tai yra vienas iš dviejų CRISPR-Cas9 sistemos komponentų, atpažįstančių tikslinę DNR ir nukreipiančios nukleazes, kad tikslinėje DNR būtų sudarytos dvigubos grandinės pertraukos. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp crRNR tracrRNR ir gRNR.
Toliau pateiktoje lentelėje apibendrinamas skirtumas tarp crRNR tracrRNR ir gRNR.
Santrauka – crRNA vs tracrRNA vs gRNA
CRISPR-Cas9 sistema yra bakterijų ir archėjų imuninė sistema. Ši sistema naudojama kaip genų redagavimo priemonė biotechnologijoje. CRISPR susideda iš dviejų tipų RNR, būtent CRISPR RNR (crRNR) ir transaktyvuojančios CRISPR RNR (tracrRNR). Jie bendrai žinomi kaip vadovasRNR arba gRNR. Ši RNR atpažįsta invazinių patogenų tikslines sekas ir nukreipia endonukleazes, kad tikslinėje DNR būtų sudarytos dvigubos grandinės pertraukos. Kai svetimoje genetinėje medžiagoje nutrūksta dvi grandinės, endogeninis taisymo mechanizmas (nehomologinis galų sujungimas; NHEJ) inaktyvuoja svetimą DNR įvesdamas mutacijas. Taigi čia apibendrinamas skirtumas tarp crRNR tracrRNR ir gRNR.
