Pagrindinis skirtumas FPLC ir HPLC yra tas, kad FPLC yra skysčių chromatografijos tipas, kuriuo išvalomos didelės biomolekulės, pvz., b altymai, nukleotidai ir peptidai, o HPLC yra skysčių chromatografijos tipas, atskiriantis mažos molekulinės masės junginius.
Skysčių chromatografija yra metodas, naudojamas mėginiui atskirti į atskirus komponentus. Šis atskyrimas atsiranda dėl konkrečių mėginių sąveikos su judriomis ir stacionariomis fazėmis. Mėginio komponentai atskiriami pagal kiekvieno komponento afinitetą judančiajai fazei skysčių chromatografijoje. Kai judri fazė ir mėginys praeina per kolonėlę, mėginio komponentai pradeda skirtis į juostas, kurias galima aptikti UV-VIS spektroskopija. Todėl FPLC ir HPLC yra dviejų tipų skysčių chromatografijos metodai.
Kas yra FPLC?
FPLC yra skysčių chromatografijos rūšis, kuri išvalo dideles biomolekules, tokias kaip b altymai, nukleotidai ir peptidai. Greita b altymų skysčių chromatografija (FPLC) pirmą kartą buvo sukurta ir Švedijoje parduota Pharmacia kompanijos 1982 m. Ji dažnai naudojama b altymų mišiniams analizuoti arba gryninti. Tai vyksta remiantis mėginio komponentų giminingumo judančiam skysčiui (judrioji fazė) ir porėtos kietos medžiagos (stacionari fazė) principu. FPLC mobilioji fazė yra buferis, o stacionari fazė yra derva, sudaryta iš granulių. Paprastai jį sudaro skersiniais ryšiais sujungta agarozė, supakuota į cilindrinę stiklinę arba plastikinę kolonėlę.
01 pav. FLPC (greitos b altymų skysčių chromatografijos) aparatas
Daugelyje FLPC strategijos naudojama jonų mainų derva. Todėl dominantis b altymas prisijungs prie dervos per krūvio sąveiką. FLPC technikoje taip pat naudojami du buferiai: 1 buferis (bėgimo buferis) ir 2 buferis (eliuavimo buferis). Iš pradžių, paleidžiant buferį ir mėginio mišinį per kolonėlę, dominantis b altymas mišinyje prisijungs prie dervos per krūvį. Tačiau dominantis b altymas atsiskiria ir grįžta į tirpalą eliuavimo buferyje, kai proceso pabaigoje eliuavimo buferis teka per kolonėlę. Vėliau tirpalas (eliuantas, kuriame yra dominančio b altymo) praeina per du detektorius, kurie matuoja druskos ir b altymų koncentraciją. Kai kiekvienas b altymas išplaunamas, aptikimo metu jis pasirodo kaip „smailė“ir gali būti renkamas tolesniam naudojimui.
Kas yra HPLC?
HPLC yra skysčių chromatografijos tipas, atskiriantis mažos molekulinės masės junginius. 1969 m. pirmasis HPLC buvo komerciškai pagamintas Waters Corporation, JAV. Taikant didelio efektyvumo skysčių chromatografiją (HPLC), mėginio mišinys (analitė) tirpiklyje (judrioje fazėje) aukštu slėgiu pumpuojamas per kolonėlę su chromatografine užpildo medžiaga (stacionari fazė). Mėginio mišinį neša judantis helio arba azoto dujų srautas.
02 paveikslas: HPLC (didelės našumo skysčių chromatografija)
Mėginio mišinio komponentai, kurie mažiausiai sąveikauja su stacionaria faze arba daugiausia sąveikauja su judančia faze, greičiau išeis iš kolonėlės. Kita vertus, komponentai mėginio mišinyje, kurie daugiausia sąveikauja su stacionaria faze arba mažiausiai sąveikauja su judriąja faze, iš kolonėlės išeis lėčiau. Remiantis aukščiau pateiktu sąveikos principu, mėginio mišinio komponentus galima atskirti. Be to, prietaiso detektorius identifikuoja kiekvieną mėginio mišinio komponentą, kuris išeina iš kolonėlės. HPLC naudojama aplinkos ir biologiniams mėginiams patikrinti, ar nėra žinomų junginių, tokių kaip vaistai, toksinai ar pesticidai. Jis naudojamas įvairiose pramonės šakose, pvz., farmacijos, aplinkosaugos, teismo ekspertizės ir chemijos srityse.
Kokie yra FPLC ir HPLC panašumai?
- FPLC ir HPLC yra skysčių chromatografijos tipai.
- Abu naudojami biologiniams mėginiams atskirti ir identifikuoti.
- Jie turi skystą judančią fazę ir kietą stacionarią fazę.
- Abu metodai naudoja stulpelį, kad praeitų pro mėginį.
- Šiuose metoduose naudojami siurbliai, detektoriai, vožtuvai ir programinė įranga mėginiams atskirti ir aptikti.
Kuo skiriasi FPLC ir HPLC?
FPLC yra skysčių chromatografijos tipas, naudojamas didelėms biomolekulėms, tokioms kaip b altymai, nukleotidai ir peptidai, išvalyti. HPLC yra skysčių chromatografijos tipas, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams atskirti. Taigi, tai yra pagrindinis skirtumas tarp FPLC ir HPLC. Be to, FPLC naudoja pH ir laidumo monitorius, taip pat šulinius kaip frakcijų rinktuvus. Priešingai, HPLC nenaudoja pH ir laidumo monitorių bei frakcijų rinktuvų.
Toliau pateiktoje infografijoje lentelės forma pateikiama daugiau skirtumų tarp FPLC ir HPLC.
Santrauka – FPLC vs HPLC
Chromatografija yra laboratorinis analizės metodas, naudojamas komponentams atskirti iš mišinio. Jis skirstomas į keletą tipų, pvz., kolonėlių chromatografiją, dujų chromatografiją, skysčių chromatografiją, jonų mainų chromatografiją ir kt. FPLC ir HPLC yra dviejų tipų skysčių chromatografijos metodai. FPLC yra skysčių chromatografijos tipas, naudojamas didelėms biomolekulėms, tokioms kaip b altymai, nukleotidai ir peptidai, išvalyti. Kita vertus, HPLC yra skysčių chromatografijos tipas, naudojamas mažos molekulinės masės junginiams atskirti. Taigi, tai yra santrauka, kuo skiriasi FPLC ir HPLC.
