Pagrindinis skirtumas – trumpalaikė ir stabili transfekcija
Transfekcija yra procesas, susijęs su eukariotinių ląstelių genų perkėlimu cheminiais arba fiziniais metodais. Transfekcija gali būti suskirstyta į du pagrindinius tipus, vadinamus trumpalaike transfekcija ir stabilia transfekcija. Laikinos transfekcijos metu dominantis genas nesugeba integruotis su šeimininko genomu ir yra trumpam ekspresuojamas šeimininko viduje, o esant stabiliai transfekcijai, dominantis genas integruojasi su šeimininko genomu ir išlieka ilgą laiką keliose kartose.. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp trumpalaikės ir stabilios transfekcijos. Abiem atvejais transfekcija yra sėkminga, o genai yra išreikšti.
Kas yra laikina transfekcija?
Transfekcija yra svarbi priemonė genams įterpti į eukariotų ląsteles. Tarp dviejų transfekcijos tipų trumpalaikė transfekcija yra įprastas genų perdavimo būdas. Per vektorių svetimi genai transformuojami ląstelės-šeimininkės viduje. Kai svetima DNR patenka į šeimininko ląstelę, ji turi dvi galimybes. Jis gali arba integruotis su šeimininko genomu ir daugintis, arba likti viduje, neintegruodamasis į genomą. Laikinoji transfekcija rodo laikiną įterptų genų ekspresiją, neintegruojantis į šeimininko genomą. Genai ekspresuoja ir gamina užkoduotą b altymą, kol ląstelė dalijasi. Tačiau dėl nesugebėjimo integruotis ji negali daugintis ir patekti į ateities kartas. Šio tipo transfekcija yra sėkminga trumpą laiką. Ląstelių dalijimosi metu arba dėl kai kurių kitų veiksnių svetima DNR suyra. Laikinoji transfekcija rodoma, kai svetima DNR yra labai susisukusios DNR pavidalu.
01 pav.: Laikinoji transfekcija
Kas yra stabili transfekcija?
Stabili transfekcija rodo sėkmingą svetimo geno integraciją į šeimininko genomą. Kai svetima DNR patenka į šeimininko ląstelę, dalis svetimos DNR integruojasi su šeimininko genomu ir tampa jo dalimi. Taigi svetima DNR taip pat replikuojasi ir pereina ateities kartoms, kai replikuojasi šeimininko genomas. Šio tipo transfekcija yra sudėtinga ir reta. Tačiau dėl stabilios transfekcijos į genomą šis bruožas išlieka ilgesnį kelių kartų laikotarpį.
Stabili transfekcija yra sudėtingas procesas ir reikalauja veiksmingo DNR pristatymo ir svetimos DNR įsisavinimo į savo genomą. Taigi linijinė DNR skatina stabilią transfekciją nei žiedinė DNR. Tačiau stabilus transfekcijos greitis yra maždaug vienas iš 104 transformuotų ląstelių. Stabilią transfekciją galima stebėti kotransformuojant pasirenkamą žymenį ir atliekant dirbtinę atranką terpėje.
02 pav.: stabili transfekcija
Kuo skiriasi laikina ir stabili transfekcija?
Laikinasis prieš stabilią transfekciją |
|
| Svetimos DNR neintegruojasi į šeimininko genomą. | Svetimos DNR integruojasi su šeimininko genomu ir tampa jo dalimi. |
| Replikacija pagrindiniame kompiuteryje | |
| Lainai transfekuoti genai šeimininke nesidaugina. Todėl genai neperduodami kitoms kartoms. | Genai dauginami pagrindiniame kompiuteryje ir perduodami ateities kartoms. |
| Genų ekspresijos trukmė | |
| Genai išreiškiami ribotą laiką, o po to jie sunaikinami. | Genai tampa genomo dalimi ir išreiškiami kartos viduje ilgą laiką. |
| Naudoti | |
| Tai naudinga tiriant trumpalaikės genų ar genų produktų ekspresijos poveikį. | Tai naudinga tiriant ilgalaikį genų ekspresijos poveikį. |
| Transfekcijos aptikimas | |
| Genai yra išreikšti ir gali būti lengvai aptikti įterpus reporterio geną. | Stabilią transfekciją galima lengvai aptikti įterpus pasirenkamą žymeklį ir pasirinkus dirbtinę atranką terpėje. |
| Įvykis ir procesas | |
| Laikinoji transfekcija yra įprasta ir nėra sudėtinga atlikti. | Stabili transfekcija pasitaiko retai ir ją atlikti sudėtinga. |
| DNR prigimtis | |
| Labai superspiralinė DNR yra tinkama trumpalaikei transfekcijai. | Tiesinė DNR tinka stabiliai transfekcijai. |
| Programos | |
| Tai naudojama tiriant genų numušimą arba slopinimą slopinančiomis RNR, b altymų gamybą nedideliu mastu | Jis naudojamas b altymų gamybai atliekant didelio masto ilgalaikius farmakologijos tyrimus, genų terapiją, ilgalaikio genetinio reguliavimo mechanizmų tyrimus |
Santrauka – trumpalaikė ir stabili transfekcija
Laikinosios ir stabilios transfekcijos yra dviejų tipų transfekcijos, rodomos genui pernešant į eukariotų ląsteles ne virusinėmis sistemomis. Transformuota svetima DNR nėra integruota su šeimininko genomu trumpalaikės transfekcijos metu, tuo tarpu ji integruojasi su šeimininko genomu stabilios transfekcijos metu. Apskritai susukta DNR rodoma trumpalaikė transfekcija, o linijinė DNR teikia pirmenybę stabiliai transfekcijai. Tai yra skirtumas tarp trumpalaikės ir stabilios transfekcijos. Tačiau trumpalaikė transfekcija yra dažnesnė ir lengvesnė, palyginti su stabilia transfekcija. Tačiau vieno iš dviejų pasirinkimas priklauso nuo genų perdavimo tikslo ir tyrimo projekto trukmės.
