Pagrindinis skirtumas tarp gelio filtravimo ir afininės chromatografijos yra tas, kad gelio filtravimo chromatografija priklauso nuo analitės mėginio molekulinės masės arba dydžio skirtumų, o afininė chromatografija priklauso nuo analitės afiniteto imobilizuotam ligandui.
Chromatografijos terminas analitinėje chemijoje reiškia mišinio komponentų atskyrimo procesą naudojant skirtingus metodus. Chromatografija yra bendras pavadinimas, nurodantis daugybę skirtingų atskyrimo metodų.
Kas yra gelio filtravimo chromatografija?
Gelio filtravimo chromatografija yra analizės metodas, kai komponentų atskyrimas priklauso nuo molekulinės masės arba dydžio skirtumo. Šis metodas taip pat žinomas kaip dydžio išskyrimo chromatografija arba molekulinio sieto chromatografija. Atskyrimo technika šiame procese priklauso nuo skirtingo mėginio molekulių gebėjimo patekti į gelio filtravimo terpės poras.
Gelio filtravimo technikoje stacionarioje fazėje yra hidratuotos, kempinę primenančios medžiagos rutuliukai, kurių molekulinių matmenų poros yra siauro dydžių diapazono. Jei vandeninį tirpalą, sudarytą iš įvairių dydžių molekulių, praleidžiame per kolonėlę, kurioje yra šie „molekuliniai sietai“, molekulės, kurios yra didesnės už filtravimo terpės poras, greitai juda per kolonėlę. Priešingai, mažesnės molekulės patenka į gelio poras ir linkusios lėtai judėti per kolonėlę. Molekulės iš kolonėlės išsiskiria mažėjančio molekulinio dydžio tvarka. Čia gelio išskyrimo riba yra mažiausių molekulių, kurios negali prasiskverbti į tam tikro gelio poras, molekulinė masė.
Yra įvairių tipų gelio filtravimo metodų, tokių kaip netiesioginis gelio filtravimo metodas, pastovios būsenos gelio filtravimas, gelio granulių dializė ir kt. Netiesioginė gelio filtravimo chromatografija yra naudinga nustatant laisvuosius skydliaukės hormonus. Pastovios būsenos gelio filtravimo chromatografija yra netiesioginis metodas, dažniausiai naudingas matuojant laisvuosius steroidus, tokius kaip kortizolis, testosteronas ir kt. Kita vertus, gelio granulių dializė yra palyginti paprastesnė pastovios būsenos gelio filtravimo modifikacija.
Kas yra giminingoji chromatografija?
Afininė chromatografija yra analizės metodas ir atskyrimo metodas, kuris priklauso nuo specifinės jungimosi sąveikos tarp imobilizuoto ligando ir jo jungiamojo partnerio. Kai kurie pavyzdžiai apima antikūnų ir antigenų surišimą, fermento substrato surišimą ir fermento inhibitorių surišimą. Todėl šis metodas turi daug svarbių pritaikymų nukleino rūgščių valymui, b altymų gryninimui iš ląstelių ekstraktų ir kraujo valymui.
Šioje technikoje svarbiausia savybė yra ligandų imobilizavimas. Tam galime naudoti įvairias medžiagas, tokias kaip akrilatai ir silikagelis. Svarbu užkirsti kelią steriniams tikslinės molekulės trukdžiams ligandui. Be to, inhibitorius yra prijungtas prie kietos fazės. Šį inhibitorių vadiname tarpikliu. Klasikiniu būdu tarpiklis susideda iš angliavandenilių grandinės.
Nejudančioje afininės chromatografijos fazėje yra šerdis, tarpiklis ir ligandas. Kartais jis taip pat turi metalo joną, susietą su ligandu. Šiuo metodu stacionariai fazei tinkamiausia kieta fazė yra agarozės gelis, nes jis lengvai išpilstomas, norint užpildyti ir užpildyti kolonėlę bet kokio dydžio dervos sluoksniais, be to, ji yra pakankamai didelė, kad biomolekulės galėtų laisvai tekėti į granules ir per jas. Ligandai gali kovalentiškai prisijungti prie granulių polimero įvairiais būdais. Dažniausi tarpikliai yra bromidas, epoksidas, epoksidas su C6 rūgštimi ir diaminas. Kita vertus, ligandas, kurį galime naudoti, skiriasi priklausomai nuo tikslo, pvz., antikūnas-antigenas, geležies arba aliuminio jonai-fosfoproteinai, avidinas-biotinas, glutationas-GST, chelatorius-His-žymėti b altymai ir kt.
Kuo skiriasi gelio filtravimas ir afininė chromatografija?
Chromatografija yra svarbus analizės metodas. Gelio filtravimo chromatografija ir afininė chromatografija yra du svarbūs chromatografijos variantai. Pagrindinis skirtumas tarp gelio filtravimo ir afininės chromatografijos yra tas, kad gelio filtravimo chromatografija priklauso nuo analitės mėginio molekulinės masės arba dydžio skirtumų, o afininė chromatografija priklauso nuo analitės afiniteto imobilizuotam ligandui.
Santrauka – gelio filtravimas ir afininė chromatografija
Yra įvairių tipų chromatografijos metodai, atsižvelgiant į jų taikymą ir analitės mėginio pobūdį. Gelio filtravimas ir afininė chromatografija yra du tokie metodai. Pagrindinis skirtumas tarp gelio filtravimo ir afininės chromatografijos yra tas, kad gelio filtravimo chromatografija priklauso nuo analitės mėginio molekulinės masės arba dydžio skirtumų, o afininė chromatografija priklauso nuo analitės afiniteto imobilizuotam ligandui.
